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摘要研究背景<br>　　薄型子宫内膜通常指在辅助生殖技术(assisted reproductive technology，ART)周期中，在卵泡成熟时或充足外源性雌激素作用下，超声测量子宫内膜厚度＜7～8mm。薄型子宫内膜病理生理特点之一为内膜基底层受损，子宫动脉血流阻力增高及血管发育不良，缺血缺氧的环境使得内膜细胞生长缓慢、腺体数量减少和内膜纤维化，最终造成子宫内膜再生障碍，影响子宫内膜容受性，降低临床妊娠率及活产率。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,HucMSC)调控血管生成、免疫应答、细胞增殖与凋亡、炎症反应及纤维化等生物学过程，具有取材简单、增殖迅速、免疫原性及致瘤性低等优点，在治疗薄型子宫内膜方面的有效性已被证实，但具体机制尚未明确。HucMSC的旁分泌作用在修复损伤过程发挥着重要作用，外泌体(exosome，-ex)是旁分泌的重要载体，其内携带的微型信使核糖核酸(micro messenger ribonucleic acid，miRNA)参与组织损伤修复，可能益于薄型子宫内膜。<br>　　研究目的<br>　　(一)探索 HucMSC 与氧-糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下的受损子宫内膜上皮细胞(endometrial epithelial cell under damage，EECD)分别通过外泌体在miRNA水平上相互调节的作用与机制。<br>　　(二)观察miR-663a对95％乙醇宫腔注射构建的薄型子宫内膜小鼠的疗效。<br>　　研究方法<br>　　(一)在体外培养正常子宫内膜上皮细胞(endometrial epithelial cell,EEC)、OGD条件下的EECD以及HucMSC,采用超速离心法分别提取三者外泌体，并建立共培养体系。利用CCK8、流式细胞术、Wound healing、Transwell、蛋白质印迹法(Western Blot，WB)及定量逆转录 PCR(RT-qPCR)分别检测 HucMSC-ex与EECD-ex携带miRNA对细胞增殖、凋亡、迁移及分化的调控。通过RNA-sequence筛选、Targetscan预测、双荧光素酶报告及RT-qPCR等探索信号通路。<br>　　(二)通过95％乙醇宫腔注射构建薄型子宫内膜小鼠模型，鼠尾注射miR-663a mimic或HucMSC-ex后，取小鼠子宫内膜组织制作病理切片，利用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining，HE)统计子宫内膜厚度、Masson染色观察子宫内膜纤维化程度、RT-qPCR检测内膜修复相关基因表达、免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色及WB检验内膜修复相关蛋白表达。<br>　　研究结果<br>　　（一)HucMSC-ex 修复 EECD<br>　　1.相比EEC组，EECD组细胞增殖活性减弱，凋亡比例及迁移能力升高，对HucMSC-ex摄取能力增强。相比EECD组，EECD+HucMSC-ex组细胞增殖活性增加，凋亡比例及迁移能力减弱（P＜0.05）。<br>　　2.RNA-sequence 发现 EECD+HucMSC-ex 组中，miR-663a 显著高表达，且 miR-663a靶向结合凋亡相关基因CDKN2A的3'-UTR端。<br>　　3.上调miR-663a抑制EECD凋亡比例及迁移能力（P＜0.05）<br>　　（二）EECD-ex 启动 HucMSC 修复<br>　　1.相比 EEC-ex+HucMSC 组，EECD-ex+HucMSC 组中 HucMSC 迁移及向 EEC 分化能力增强（P＜0.05）。<br>　　2.RNA-sequence 发现 EECD-ex+HucMSC 组中 miR-21-5p 与 mi-214-5p 显著低表达，且 miR-21-5p 靶向 STAT3，miR-214-5p 靶向 PIAS3。<br>　　3.STAT3 抑制剂 Stattic 可以逆转 miR-21-5p/miR-214-5p inhibitor 对 HucMSC 迁移和分化的促进效应;STAT3激动剂Colivelin可以逆转miR-21-5p/miR-214-5p mimic对HucMSC迁移和分化的抑制效应。<br>　　（三）MiR-663a mimic或HucMSC-ex修复小鼠薄型子宫内膜<br>　　相比对照组，单独注射miR-663a mimic或HucMSC-ex均增加薄型子宫内膜小鼠的内膜厚度（miR-663a mimic:208.02±31.81μm VS.270.83±50.02μm,HucMSC-ex:162.48±41.43μm VS.197.77±79.77μm）、改善子宫内膜纤维化，改变子宫内膜修复相关因子（VEGFA、ERα、Vimentin、N-Cadherin）表达（P＜0.05）。<br>　　研究结论<br>　　（一）HucMSC-ex调控miR-663a/CDKN2A轴，是抑制EECD凋亡和迁移的机制之一。<br>　　（二）EECD-ex 中低表达的 miRNA-21-5p 和 miRNA-214-5p,激活 STAT3 信号通路，是促进HucMSC迁移和向正常EEC分化的机制之一。<br>　　（三）MiR-663a或HucMSC-ex均显著修复薄型子宫内膜小鼠的内膜损伤。