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摘要[背景]乳腺癌是女性最常见的癌症。据报道在女性癌症新发病例中，乳腺癌占比24.5％,死亡率为15.5％,均位列第一。近年来在乳腺癌症的治疗方面取得了很大进展，但手术治疗仍然是其主要的治疗手段。癌症的发生发展与多基因异常表达有关。调节肿瘤发生过程中某些关键基因的表达，阻断恶性转移，是控制肿瘤的有效手段之一。寻找乳腺癌新的关键致癌基因和信号转导通路的分子靶标研究，可能是未来乳腺癌靶向治疗的方向之一。<br>　　miRNA是一种由大约22个核苷酸组成的内源性非编码核糖核酸。被认为是人体组织生理及包括癌症在内的疾病发生发展过程的重要调节因子。miRNA作为有潜力的癌基因或肿瘤抑制基因参与多种生物学过程，如细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期阻滞、凋亡和转移等。将是未来癌症诊断和治疗的有前途的工具之一。<br>　　[目的]探讨miR-142-5p和miR-136-5p过表达对三阴性乳腺癌细胞（MDA-MB-231）生物学功能的影响及其相关的分子机制。预测二者潜在靶基因并加以验证。<br>　　[方法]（1）收集人乳腺癌组织和癌旁组织样本，进行miRNA测序和生物信息学分析，筛选差异表达的miRNA分子（上调/下调各一），并进行RT-qPCR组织表达验证。（2）CCK8实验分析两种miRNAs对MDA-MB-231细胞增殖的生物学影响。（3）细胞划痕实验分析两种miRNAs对MDA-MB-231细胞迁移的生物学影响。（4）Transwell实验分析两种miRNAs对MDA-MB-231细胞侵袭的生物学影响。（5）细胞凋亡实验分析两种miRNAs对MDA-MB-231细胞凋亡的生物学影响。（6）结合文献和生物信息学工具预测两种miRNAs的潜在靶基因，并通过RT-qPCR实验分别验证MDA-MB-231和BT-549细胞中两种miRNAs和对应潜在靶基因之间的表达关系。（7）Westernblot实验分析两种miRNAs对潜在靶基因在MDA-MB-231细胞中蛋白水平表达影响。（8）免疫荧光和Westernblot实验检测两种miRNAs对应的潜在靶基因在三阴性乳腺癌组织及癌旁组织样本中蛋白水平表达。（9）构建双荧光素酶报告基因质粒，分析两种miRNAs和对应潜在靶基因之间的靶向关系。<br>　　[结果]（1）对乳腺癌组织样本进行miRNA测序和生物信息学分析，选择同时在TNBC组和LuminalA组显著上调或下调2倍以上（log2foldchange＞2或log2foldchange＜-2）的2个miRNAs分子:miR-142-5p（上调）和miR-136-5p（下调）作为研究对象。进一步RT-qPCR验证结果显示，miR-142-5p在三阴性乳腺癌组织中表达水平显著高于癌旁组织;miR-136-5p在三阴性乳腺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）。（2）CCK8实验结果显示，与对照组相比，在MDA-MB-231细胞中瞬时过表达miR-142-5p后细胞增殖能力显著增强（P＜0.01）;瞬时过表达miR-136-5p后细胞增殖能力显著减弱（P＜0.01）。（3）划痕实验结果显示，与对照组相比，在MDA-MB-231细胞中瞬时过表达miR-142-5p后细胞迁移能力显著增强（P＜0.01）;瞬时过表达miR-136-5p后细胞迁移能力显著减弱（P＜0.01）。（4）Transwell实验结果显示，和对照组相比，在MDA-MB-231细胞中瞬时过表达miR-142-5p后细胞侵袭能力显著增强（P＜0.01）;瞬时过表达miR-136-5p后细胞侵袭能力显著减弱（P＜0.01）。（5）细胞凋亡实验结果显示，相对于对照组NC，在MDA-MB-231细胞中瞬时过表达miR-142-5p后细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）;瞬时过表达miR-136-5p后细胞晚期凋亡率显著增加（P＜0.05）。（6）结合文献和生物信息学工具预测两种miRNAs的潜在靶基因:miR-142-5p为CCNG2,miR-136-5p为DOCK5。RT-qPCR实验结果显示，与对照组相比，在MDA-MB-231细胞中瞬时过表达miR-142-5p后CCNG2表达显著降低（P＜0.01）;瞬时过表达miR-136-5p后DOCK5表达显著降低（P＜0.01）。在BT-549细胞中的实验结果与上述一致。（7）westernblot实验结果显示，与对照组相比，在MDA-MB-231细胞中瞬时过表达miR-142-5p后CCNG2蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）;瞬时过表达miR-136-5p后DOCK5蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）。（8）双荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-136-5p可以结合在DOCK5mRNA的3''UTR区，显著抑制荧光素酶活性（P＜0.01）;而miR-142-5p不能结合在CCNG2mRNA的3''UTR区，对荧光素酶活性无明显影响（P＞0.05）。<br>　　[结论]（1）在三阴性乳腺癌细胞中miR-142-5p可能主要作为促癌miRNA发挥生物学功能;miR-136-5p可能主要作为抑癌miRNA发挥生物学功能。<br>　　（2）CCNG2基因和miR-142-5p之间不存在直接靶向结合关系。miR-142-5p可能通过其他途径抑制CCNG2的表达从而达到促癌作用。<br>　　DOCK5基因是miR-136-5p的潜在靶基因，两者存在靶向结合关系。miR-136-5p可能通过抑制DOCK5的表达这一调节通路从而达到抑癌作用。