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摘要背景和目的:神经炎症（Neuroinflammation）是指中枢神经系统中发生的炎症反应，在神经系统疾病的发生发展中起重要作用，特别与神经退行性疾病的进展密切相关。小胶质细胞是中枢神经系统中特有的免疫细胞，在受到外界刺激或损伤时，小胶质细胞可由静息状态激活转化为促炎病理性状态，释放炎症因子，诱导或加重神经炎症的发生。因此减少小胶质细胞异常活化，对减缓神经炎症，预防和治疗神经退行性疾病具有重要意义。山茱萸作为一味常见中药，具有多种药用价值。已有研究发现，山茱萸的某些单体成分，如马钱子苷、莫诺苷等能改善神经功能，抑制炎症的发生，但对其机制研究目前仍在探索阶段。本研究应用网络药理学和文献计量学方法挖掘山茱萸抑制神经炎症的活性成分及作用靶点，通过GO和KEGG富集分析，更加高效地预测其有效成分抑制神经炎症的信号通路和作用机制，并根据分析结果，进行体外实验研究。实验采用LPS刺激BV2小胶质细胞建立炎症模型，探究前期筛选得到的有效成分莫诺苷对炎症条件下BV2细胞的保护作用和机制，以期为神经退行性疾病的药物预防和治疗提供新的思路和实验依据。<br>　　方法:一、网络药理学分析。1.利用TCMSP数据库、SwissTargetPrediction等平台及文献检索，得到山茱萸的活性成分及潜在靶点;通过GeneCards、CTD数据库筛选神经炎症的预测作用靶点。2.通过Venny2.1获得药物活性成分与神经炎症的共同靶点，导入STRING平台绘制蛋白相互作用网络（PPI）图。3.在Cytoscape软件中，对PPI互作网络图进行拓扑分析，得到山茱萸活性成分作用于神经炎症的核心靶点。4.构建预测靶点-有效成分-药物的PPI互作网络图，可视化三者网络关系。5.运用DAVID数据库，对潜在靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。6.通过WoS数据库和CitesccapeV分析软件对近十年来神经炎症作用机制相关研究进行关键词分析，完善网络药理学分析结果。<br>　　二、体外实验。1.莫诺苷（0μM、25μM、50μM、100μM、200μM和400μM）孵育BV2小胶质细胞24h,采用CCK-8法检测不同浓度莫诺苷对BV2细胞的毒性，确定适宜的莫诺苷作用浓度。2.建立细胞模型:一组对照组，一组给予1μg/mLLPS刺激BV2细胞24h（LPS组），一组为莫诺苷预处理BV2细胞24h后再给予1μg/mLLPS刺激24h（LPS+莫诺苷组）。3.使用普通光学倒置显微镜观察各组细胞形态学变化。4.提取各组细胞蛋白，WesternBlot检测炎性因子IL-1β、iNOS、TNF-α,信号蛋白AKT、P-AKT;NF-κB;炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Pro-Caspase1、Cleaved-Caspase1表达情况。5.免疫荧光法检测NLRP3表达情况以及NF-κB核转位现象。<br>　　结果:一、网络药理学分析。1.通过数据挖掘得到包括神经酸、艾蒿素、莫诺苷和山茱萸新苷等25种药物活性成分，511个潜在靶点和3773个神经炎症相关靶点。2.交集得到250个山茱萸抑制神经炎症的作用靶点，44个抑制神经炎症的核心靶点，包括AKT1、MAPK3、IL-6、TNF等。3.通过GO分析，作用靶点主要富集在细胞质膜、胞质及胞浆;参与的主要生物学过程包括免疫应答、蛋白质磷酸化、对外源性刺激的反应等;涉及到的分子功能为蛋白丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶活性等。4.KEGG富集和文献计量学分析得出，参与这一过程的主要通路有PI3K-AKT,TRP通道的炎症介质调节，NF-κB和NLRP3炎症小体等。<br>　　二、体外实验。1.CCK-8结果显示200μM浓度莫诺苷对BV2细胞无明显毒性，选择200μM作为后续实验浓度。2.细胞形态学结果表明，莫诺苷能够显著抑制LPS刺激下BV2细胞呈阿米巴样的形态变化。3.WesternBlot结果表明，莫诺苷能够降低炎性因子iNOS、TNF-α和IL-1β的表达，LPS+莫诺苷组P-AKT/AKT表达量相对比例较LPS组显著降低，炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Pro-Caspase1、Cleaved-Caspase1和NF-κB的表达也呈下降趋势。4.免疫荧光检测结果表明，与LPS组相比，LPS+莫诺苷组NLRP3荧光强度减弱，NF-κB核转位现象受到抑制。<br>　　结论:本研究综合运用网络药理学、文献计量学结合体外实验，发现山茱萸有效成分莫诺苷对炎症条件下BV2细胞具有保护作用，其机制可能在于莫诺苷对AKT通路和NLRP3炎症小体的调控，从而抑制促炎型BV2小胶质细胞的增殖和炎性因子的释放。