换一批
换一批摘要该研究旨在利用分子生物学技术克隆和表达包含功能区的人DPP片段,为进一步通过对人DPP功能片段的研究揭示DPP在牙齿发育和牙髓修复中的作用及其机制奠定基础.第一部分 人牙本质磷蛋白基因全序列的亚克隆及其5'端序列的克隆和分析 该文建立了稳定的人DPP重组质粒pBV-222-DPP;以质粒pBlueBacHis2-DPP为模板,扩增人DPP基因5'端序列,克隆至载体pGEM-T,构成重组质粒pT-DPP-N,DNA序列测定插入片段为人DPP cDNA5'端序列,大小为504bp.用蛋白序列分析软件包ANTHEPROT4.5预测分析显示：该序列全长168个氨基酸,氨基酸组成显示其富含天门冬氨酸和丝氨酸,含RGD序列和DSS重复序列;PI为3.115;分子量为16869.1Da.第二部分 人牙本质磷蛋白5'端序列的表达和纯化 为了表达人DPP蛋白5端序列,采用两种表达载体进行表达.1.人DPP5'端序列的真核表达：构建了人DPP 5'端序列的杆状病毒表达质粒pFastBacHb-hDPP-N,经BH10BAC转座反应后感染昆虫细胞sf9,进行重组蛋白的表达.2.人DPP5'端序列的原核表达：构建带有人DPP基因5'端序列的GST融合蛋白表达质粒.
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