摘要目的:探讨脂质体包覆环肽(cRGD)和吲哚菁绿(ICG)制备的新型光热剂纳米颗粒(ICG@Lips-cRGDNPs)所产生的光热及一氧化氮性能;研究ICG@Lips-cRGD NPs对促进胶质瘤U87MG细胞凋亡的影响,以及抑制热休克蛋白(HSPs)的表达,提升该ICG@Lips-cRGD NPs的光热治疗(PTT)效果;进一步探究ICG@Lips-cRGDNPs在胶质瘤小鼠模型中的治疗效果。方法:通过脂质体薄膜分散法合成ICG@Lips-cRGDNPs。(1)物理表征:使用透射电子束显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)、马尔文粒径/电位仪(DLS)分析表征所合成的纳米颗粒形貌与尺寸;(2)荧光性能测试:通过紫外-可见分光光度法、荧光分光光度法和近红外二区(900-1700 nm,NIR-Ⅱ)荧光显微成像系统对纳米颗粒进行荧光性能检测;(3)光热、光动力、一氧化氮气体性能测试:使用红外热成像仪对纳米颗粒的光热性能进行检测,使用活性氧(ROS)、一氧化氮检(NO)测探针对纳米颗粒的ROS和NO生成能力进行评估;(4)肿瘤细胞抑制效果评估:使用Cell Counting Kit-8(CCK8)、激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)荧光成像、ROS荧光成像实验、细胞凋亡荧光成像实验和流式细胞凋亡实验分别探究ICG@Lips-cRGDNPs对U87 MG细胞的毒性、肿瘤细胞荧光标记能力和光动力、光热-气体协同治疗(PDT-PTT-GT)促进肿瘤细胞凋亡的影响;(5)使用蛋白质免疫印迹法(WB)、免疫荧光标记法对NO抑制肿瘤细胞中的HSPs的表达进行评估;(6)动物模型评估纳米颗粒的肿瘤抑制率:分别使用皮下肿瘤模型和原位脑胶质瘤小鼠模型评估纳米颗粒的肿瘤抑制率。结果:(1)物理表征:SEM和TEM电镜结果显示,合成的ICG@Lips-cRGDNPs呈现均匀的球形结构,DLS结果表明纳米颗粒大小约为100 nm,Zeta电位约为-30 mV;(2)荧光性能测试:ICG@Lips-cRGD NPs的吸收峰在804 nm,荧光峰在848 nm左右,荧光稳定性测试结果显示,ICG@Lips-cRGDNPs较ICG具有良好的溶液稳定性和荧光稳定性;(3)光热实验结果显示,纳米颗粒的光热转换效率为37.1%,光动力效率也比单纯ICG更好,NO释放效率与纳米颗粒浓度和激光功率成正比;(4)制备的ICG@Lips-cRGD NPs可以很好的被肿瘤细胞摄取,在CLSM下也具有较强的活性氧以及NO信号强度,ICG@Lips-cRGD NPs+laser组(P<0.05),细胞层面的光动力效果显著;(5)ICG@Lips-cRGDNPs所产生的NO可以有效抑制肿瘤细胞中HSP 70的表达;(6)ICG@Lips-cRGD NPs对脑胶质瘤小鼠展示了较好的光热治疗效果,有效抑制了肿瘤细胞中的HSPs的表达,提升了 PTT效果,控制了肿瘤的生长,且体内重要器官未见明显损伤。结论:本研究设计了一种具有肿瘤靶向性的ICG@Lips-cRGDNPs,引入的cRGD靶向环肽不仅具有肿瘤靶向能力,而且在808 nm近红外激光照射下,还能产生NO,抑制HSP70的表达来增强光热性能。此外,ICG@Lips-cRGDNPs还能对小鼠脑血管进行深度成像,并对原位胶质瘤进行PTT-PDT-GT三重协同治疗,为癌症治疗提供了一种前景广阔的策略。
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