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摘要研究背景及目的<br>　　CD4+T细胞是适应性免疫系统的重要成员，其功能异常与多种人类疾病密切相关，如过度增多的促炎性CD4+T细胞是自身免疫疾病的重要诱因。CD4+T细胞发育分化、稳态维持受到复杂的调控，其中基因转录后调控的重要作用被越来越多的研究证实。<br>　　Poly(rC)结合蛋白(Poly(rC)-binding proteins，Pcbps)是一个广泛表达的RBP基因家族，它能够通过识别特殊的RNA结合域与具有高亲和力的同源多核苷酸C(Poly(C))相互作用，参与到RNA的剪切、转运、序列编辑、胞内定位及翻译控制等多个转录后调控过程中，主要亚型是PCBP1和PCBP2。已有文献报道，PCBP1通过对细胞毒性T细胞和调节性T细胞分化的不同调控来形成耐受和免疫，PCBP1的缺失促进Treg分化等。PCBP2在抗病毒免疫，抗肿瘤免疫反应等起到重要作用，被认为是促进肿瘤发生、癌细胞发展和转移的致癌基因。然而，仅有少数文章报道PCBP2对CD4+T细胞谱系的发育和功能有重要作用，未来仍需要更多研究促进PCBP2在CD4+T淋巴细胞的维持和激活中功能的理解，并进一步揭示PCBP2是否参与到自身免疫性疾病的发生发展。<br>　　RNA的化学修饰对RNA稳定性和翻译活性有重要影响，N4-乙酰胞苷(N4-acetylcytidine,ac4C)是高度保守的RNA修饰，并且是报道的第一个表观转录组标记的乙酰化核苷。已有文章报道，ac4C修饰可能与人类多种疾病的发生发展有关。但到目前为止对N-乙酰转移酶(N-acetyltransferase 10,NAT10)介导的mRNAac4C修饰在自身免疫性疾病进展过程中的分子动力学和功能的研究仍然缺乏。<br>　　本研究旨在探索PCBP2参与调控RNA的乙酰化水平对哺乳动物系统中T细胞发育和功能的影响，进一步探索其是否影响实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis(EAE))的发生发展以及具体机制。同时对CD4+T细胞中组蛋白的功能作用展开初步探索。<br>　　研究方法<br>　　本课题利用shRNA构建稳定的PCBP2基因敲低细胞株，通过Dot blot实验探究敲低PCBP2后，RNA乙酰化修饰水平变化。构建CD4-Cre Pcbp2fl/fl基因敲除鼠，利用Dot blot技术检测Th1和Th17细胞RNA乙酰化修饰水平变化。应用acRIP-Seq和ac4C RedaC:T-seq结合分子生物学实验等，明确敲除PCBP2促进Th1细胞RNA乙酰化修饰增多的现象。应用流式细胞术、western blot和电镜实验等，明确敲除PCBP2促进CD4+T细胞凋亡。最后使用CD4-Cre Pcbp2fl/fl基因敲除鼠，构建两个自身免疫性疾病动物模型:髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)诱导的EAE和葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS)诱导的炎症性肠病(Inflammatory bowel disease IBD),探讨T细胞上敲除Pcbp2对EAE及IBD发病及其严重程度的影响。<br>　　研究结果<br>　　1.CD4+T细胞中敲除Pcbp2不影响小鼠胸腺中CD4+T细胞数量及占比;<br>　　2.CD4+T细胞中敲除Pcbp2不影响CD4+T细胞在胸腺中的早期发育，但减少外周免疫系统中CD4+T细胞数量;<br>　　3.CD4+T细胞中敲除Pcbp2促进CD4+T细胞凋亡;<br>　　4.CD4+T细胞中敲除Pcbp2抑制EAE发生;<br>　　5.PCBP2蛋白通过与NAT10蛋白相互作用抑制CD4+T细胞中RNA乙酰化;<br>　　6.PCBP2调控CTSD mRNA乙酰化水平，进而增加其稳定性和促进翻译;<br>　　7.敲除Pcbp2导致细胞中溶酶体-线粒体介导的细胞凋亡通路激活:CTSD/BID/Cyt c/Caspase3;<br>　　8.胞浆组蛋白在活化的T细胞中表达更高;<br>　　9.胞浆组蛋白在CD4+T细胞分化周期中发挥作用;<br>　　10.dsRNA在辅助性T细胞中诱导胞浆组蛋白;<br>　　11.胞浆组蛋白是促炎性CD4+T细胞的标志物。<br>　　结论和意义<br>　　1.明确了 PCBP2在T细胞稳态维持中的作用;<br>　　2.揭示T细胞中PCBP2缺失导致细胞死亡的新机制;<br>　　3.证明了 T细胞存在胞浆组蛋白;<br>　　4.胞浆组蛋白是促炎性CD4+T细胞的标志物;<br>　　5.为靶向自身反应性T细胞治疗自身免疫性疾病提供新的理论方向。