换一批
换一批摘要该论文就HBV包膜M蛋白在原核大肠杆菌（E.coli）和真核Pichia系统的表达、性质鉴定及免疫原性等进行了系统详细的研究.在原核系统中表达preS2多肽,为HBV包膜M蛋白的活性检测提供材料.将人工合成preS2的全基因插入E.coli表达载体pThioHisA,以硫氧还蛋白融合蛋白的形成实现高效表达.经渗透压处理初步纯化蛋白,获得了具有preS2抗原性的thioredoxin-preS2融合蛋白.为了在Pichia系统中高表达HBV包膜M蛋白,用限制性内切酶SacI+SalI消化质粒pPIC3.5k和pAO815,替换对等部分,组成新的毕赤酵母高拷贝整合型表达载体pAO818.用它构建表达HBV包膜S蛋白的重组质粒,获得稳定的高表达.证实新载体改建成功后,将M蛋白编码基因插入酵母整合型表达质料pAO818的醇氧化酶（AOX1）启动子下游,构建携带8拷贝M表达盒的重组载体,经电转化SMD1168菌株和G418筛选,得到了高效分泌表达M蛋白的毕赤酵母菌株,表达量达到50mg/L.通过CsCl等密度梯度离心的初步纯化,分泌型重组M蛋白具有preS2和S抗原性,可以形成大小在22nm左右的颗粒,并具有一定程度的糖基化.
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