基因工程改造Pichia pastoris生产SAM GABA<,A>受体α1亚基BZ结合位点结构特征-论文-万方医学网

基因工程改造Pichia pastoris生产SAM GABA<,A>受体α1亚基BZ结合位点结构特征

导出原文传递学术成果认领

收藏纠错

摘要该研究显示,重组表达外源SAM合成酶的Pichia pastoris是一个很有前途的SAM高产菌.将一个带有S.cerevisiae基因的胞内表达质粒转化入Pichia pastoris菌株GS115.经过C418抗性筛选得到一株有两个基因拷贝的转化子.胱硫醚合成酶（Cystathione beta-synthase,CBS)是半胱氨酸代谢中的一个重要的酶.以PCR技术为主,克隆了Pichia pastoris来源的CBS基因.首先根据不同来源的CBS基因的序列比对结果,设计了一对SBS的专一性简并引物,用它扩增出Pichia pastoris CBS基因的一个保守片段.根据这段DNA的序列,设计了5’RACE和3’RACE的引物.分别克隆了该基因的3’区和5’区.γ-氨基丁酸A型受体（GABA<,A>）受体α1亚基的片段Gln28-Leu296,Gln28-Arg276,Gln28-Arg248,Cys166-Leu296和Gln28-Glu165分别应用圆二色光谱,荧光光谱研究了其结构特性和结合特性.对Y187A,T234A和Y237A的突变引起了受体二级结构的变化,对两个色氨酸残基的突变体W198Y和W273Y的研究显示Trp273要比Trp198更为靠近结合位点.