换一批
换一批摘要目的:联合应用连续石蜡切片-HE染色-免疫组化-显微切割-PCR检测诱发大鼠肺鳞癌发生发展各阶段微小病灶中基因及其产物异常.探讨在3- 甲基胆蒽(3-methylcholanthrene,MCA)和二乙基亚硝胺(Diethylinitrosamine,DEN)诱导大鼠肺支气管粘膜上皮细胞通过癌前病变形成鳞癌过程中,K-ras基因突变、蛋白表达的作用及其相关性.方法:选取3-甲基胆蒽和二乙基亚硝胺诱发大鼠肺鳞状细胞癌石蜡标本,连续切片,切片用于HE染色确定肺癌发生发展的病变阶段,及免疫组化检测各阶段K-ras蛋白表达,及用于显微切割,定点对位分别切割由正常支气管粘膜上皮细胞演变成癌细胞及癌浸润、侵袭转移各阶段病灶主质的同类细胞群,提取DNA,用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测各阶段K-ras基因第一、二外显子突变.结论:联合应用连续石蜡切片-HE染色-免疫组化-显微切割技术使定点对位分析肿瘤发生发展各阶段微小病灶同类细胞群中基因及其产物的异常得以实现,对于肿瘤发生机制、分子病理及体内基因表达调控机制的研究有重要价值.在3-甲基胆蒽和二乙基亚硝胺诱发的大鼠肺鳞癌发生发展中,K-ras基因的蛋白表达与第一、二外显子突变无关.K-ras基因的激活是早期事件,参与了肿瘤的发生过程,而K-ras基因突变的作用可能不大.
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