换一批
换一批摘要日渐兴起的干细胞治疗对于多种遗传性和获得性疾病都具有广泛的应用前景.ES细胞以其特有的优势而成为细胞替代性治疗中理想的细胞供应源.ES细胞能够在体外培养和繁殖,具有全能的分化和发育潜力,还可以通过随机整合或同源重组而进行遗传修饰,将两种新兴的治疗方法,基因治疗和细胞治疗,有机地结合起来.在该研究中,我们首次采用EGFP基因作为标记基因,在HPRT基因位点,获得了定位标记的ES细胞.首次成功应用PCR技术扩增了同源序列,构建了定位打靶载体pHPRT-EGFP,得到了EGFP基因普遍表达、能够发出绿色荧光、并保持ES细胞正常特性的细胞系;绿色荧光在转化细胞进行体外培养、传代和分化时仍能够稳定表达.当将该ES细胞悬浮培养时,可以聚集和形成类胚;在类胚发育的不同阶段及其再次贴壁、伸展和分化成各种不同类型的细胞时,仍可见到EGFP基因的稳定表达.定位标记的ES细胞为移植和干细胞治疗的研究提供了方便而有效的细胞追踪和操作的途径.
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