换一批摘要该研究采用修饰的贴壁差异法进行O2A祖细胞的纯化,用免疫细胞化学和诱导分化对其鉴定,用改良培养基进行扩增;利用基因工程技术,以Cre/loxp介导的细胞内同源重组方法构建了含不同启动子的p75NTR和EGFP腺病毒载体,完成对O2A祖细胞修饰后,观察了移植修饰细胞对受损脊髓功能修复的影响.主要结果及结论如下: 1.新生大鼠大脑皮层的原代混合胶质细胞培养,用修饰的贴壁差异法进行分离纯化后,兔疫细胞化学染色证实纯化细胞有特征性标记A2B5,血清可诱导其分化为星形胶质细胞和少突胶质细胞,T3则刺激其向少突胶质细胞分化.说明纯化的细胞为O2A祖细胞,并具有定向分化能力. 2.O2A祖细胞可在星形胶质细胞条件培养基中存活、增殖,表明星形胶质细胞条件培养基含有O2A祖细胞的有丝分裂原.免疫细胞化学染色发现,培养条件下,少突胶质细胞有一定水平的p75NTR表达,而O2A祖细胞几乎无p75NTR阳性显色. 3.用分子克隆技术成功构建了含CMV或MBP启动子的穿梭质粒:pCMV-p75-shuttle、pCMV-EGFP-shuttle、pMBP-p75-shuttle、pMBP-EGFP- shutt1e;并完成了扩增腺病毒基因组质粒的氯化铯法纯化和酶切鉴定.4.结合荧光金逆行示踪技术,发现腺病毒载体介导的p75NTR过表达并不诱导脊髓运动神经元凋亡.5.用成年大鼠颈髓皮质脊髓束横断损伤模型,结合行为学检测、FG和BDA示踪、免疫细胞化学及病理学检测,观察p75NTR基因修饰的O2A祖细胞移植对受损脊髓的影响.发现修饰细胞无转移基因的渗漏性表达,对皮层投射神经元的存活无明显影响,移植细胞可迁移进入损伤区周围,并发挥髓鞘形成作用,明显促进损伤脊髓的功能恢复.
更多相关知识
- 浏览4
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
