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摘要目的:首先应用透射电子显微镜,共聚焦显微镜技术检测胃癌耐药细胞形态学的变化;通过流式细胞仪技术检测化疗药物对亲本敏感胃癌细胞和耐药细胞的细胞周期的影响.并根据所观察到的形态学特征,从63个被差异显示出的耐药相关基因中选出6个基因,分别为NPD017、TTC-1、ME3、MRS2L、TBPIP和MAD2.克隆鉴定该六个耐药相关基因,并进行基因的功能学分析,以探讨耐药相关基因可能的耐药作用机制.结论:(1).耐药细胞胞内药物分布表现为核浆比例逆转,药物分布具有内膜系统的特征,提示核浆转运和胞外分泌途径参与了胃癌细胞多药耐药性的形成.(2).耐药细胞核膜明显地不规则、深陷甚至卷曲.细胞膜之间突触样的联系增多,并能形成细胞间小管结构.提示耐药细胞的核膜和核孔的形态和组成可能发生了一定的变化,胃癌耐药细胞可能借助其特有的结构细胞间小管,将蓄积药物通过胞外分泌和脂质分泌途径排出体内.(3).阿霉素能将亲本细胞SGC7901阻滞在G2/M期,而耐药细胞不被阻滞在G2/M期.能够进入下一个细胞周期,细胞周期分布基本上无变化.这提示耐药细胞能够克服化疗药物引起的细胞周期阻滞,涉及细胞周期调节的分子参与了胃癌细胞耐药性的形成.(4).通过纵向和横向综合比较该六个耐药相关基因,初步得出MAD2β和ME3具有较强的促进胃癌细胞产生多药耐药性的作用,MAD2β和ME3基因所导致的耐药性既能使胃癌细胞对DNA损伤剂MMC和ADR产生一定的抵抗性,也能使胃癌细胞对以微管为靶向的药物产生一定的抵抗性,具有较广泛的耐药谱,提示二者可能为具有一定价值的耐药相关基因.(5).MAD2β基因是MAD2基因的一个选择性剪接体,该形式未见文献报道,在GenBank注册,其收录编号为AF394735.