换一批摘要在该研究中,我们选择了VCX/Y家族中的VCY和VCX-8r作为研究对象,将VCY cDNA克隆到pGEX-4T3载体,在大肠杆菌中进行了GST-VCY融合蛋白的表达与纯化.以纯化的GST-VCY蛋白免疫新西兰大白兔,最后获得了抗GST-VCY蛋白的多克隆抗体.利用该抗体进行的免疫组织化研究显示,VCY表达蛋白定位于人睾丸生精上皮组织中的精原、精母及圆形精子细胞的细胞核部位,并在某些核内有着类似核仁的强染色点富集;而在已经变形的精子细胞中则未观察到阳性信号.将VCY和VCY-8r cDNA都克隆到pEGFP-N1载体,构建成功绿色荧光融全表达质粒pEGFP-N1-VCY和pEGFP-N1-VCY-8r,将两种质粒载体分别转染COS7细胞后,借助碘化丙啶染色的化学荧光技术和共聚焦显微镜观察发现,VCY和VCX-8r都被定位在COS7细胞的细胞核,并且在核仁明显的细胞内出现荧光信号在核仁部位的富集;将VCX-8r克隆到红色荧光载体pDsRed-N1,并将其与pEGFP-N1-VCY质粒一起对COS7细胞进行共转染,利用光共聚焦显微镜进行观察发现,VCY和VCY-8r蛋白显示出了完全的共定位结果.另外,利用相同的技术方法,我们构建了VCY的系列缺失突变体,通过对缺失突变体的定位研究,验证了双重核定位序列对VCX/Y家族蛋白质定位的重要性;而且还确定,重复序列区在VCX/Y家族蛋白质的核仁定位中起决定作用,完整的N端序列可能也与核内的正确定位有关.
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2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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