换一批
换一批摘要HAb18G是特异性抗人肝癌单克隆抗体HAb18所结合的抗原蛋白.结构分析表明,其质膜外区有33个N-糖基化位点.该研究主要是鉴定HAb18G的表位是否为糖链.首先,通过高碘酸氧化作用破坏抗原的糖链,用Western Blot检测抗原抗体结合的能力.同时用已知针对抗原肽表位的抗体作为对照.得到的结果是糖链的破坏影响到抗原抗体结合,初步确认该抗原的识别表位为糖链.然后,运用免疫细胞化学和流式细胞术,通过衣霉素抑制N-连接糖链的合成,进而检测人肝癌细胞系BEL-7402质膜上HAb18G与其抗体结合的能力是否有所改变.结果发现衣霉素处理的浓度越大,作用时间越长,二者结合的能力越弱.进一步证实HAb18G的表位为N-连接糖链.另外该研究还对该表位是否为唾液酸作出初步鉴定,首先用HC1水解肝癌细胞系BEL-7402裂解产物中的唾液酸,发现抗原结合抗体能力消失.由于该方法特异性不高,于是进一步用神经氨酸酶(唾液酸酶)来验证,发现有明显差异.初步肯定该抗原表位为N-连接糖链中的唾液酸.
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