换一批
换一批摘要目的 研究证实,95﹪的尤文肿瘤家族具有特异性t染色体易位,形成的EWS-FLI-1融合蛋白可以识别、结合一段特异基因序列(ACCGGAAGT)并且激活其下游基因表达.该研究通过定向克隆,构建了含有该特异序列和白喉毒素A链(DTA)基因的真核表达载体.转染体外培养的尤文肉瘤细胞后,检测DTA表达及其对细胞的杀伤作用,为肿瘤特异性基因治疗探索新的方法.方法 1、用脂质体法,把含有EWS-FLI-1特异结合基因序列的虫荧光毒酶报告质粒(pS2)转染到体外培养的尤文肉瘤细胞系(RD-ES、SK-ES)以及对照细胞系(Hela、NIH3T3).通过荧光分光光度计检测相对荧光强度,比较虫光素酶的表达.2、用定向克隆的方法,把DTA片段在NcoI和XbaI位点替换pS2中的虫荧光素酶基因.构建新载体pS2-DTA.双酶切以及测序验证.3、共转染p32和pS2-DTA,检测相对荧光强度,验证pS2-DTA转染成功,并且对虫荧光素酶合成产生抑制作用.4、转染pS2-DTA后,通过RT-PCR和免疫组化检测DTA的表达、TUNEL法检测细胞凋亡、台盼蓝拒染实验比较细胞存活率、细胞形态学和生物学变化等指标观察其对尤文肉瘤细胞的杀伤作用.
更多相关知识
- 浏览0
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
