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摘要研究背景与研究目的:肿瘤的发生、发展和转移是一个多因素、多步骤的多基因参与的复杂过程.其中癌基因的激活或抑癌基因的失活是肿瘤发生发展最基本的分子基础.在从正常细胞向肿瘤细胞转变的过程中寻找发生变化的基因(包括基因转录增强、基因突变或缺失等),了解在肿瘤发生发展中的作用,进一步阐明其作用的分子机制,对其本身加以修正或封闭其产物,并结合放疗、化疗等其它的治疗方法从而抑制肿瘤生长从而治疗肿瘤,是临床肿瘤治疗的最终目的.研究方法:①利用免疫组织化学法检测了TIP30/CC<,3>基因在肝癌和癌旁组织的表达,并分析了与肝硬化以及肿瘤包膜、分化程度、侵袭转移等临床指标间的关系.②利用一种安全、高效的Ad-Easy I<'TM>系统构建了TIP30/CC<,3>基因的复制缺陷型腺病毒载体,为后续实验准备了平台.③利用双层软克隆形成实验和invasion chamber模型体外实验探讨导入TIP30/CC<,3>基因后高转移性肝癌细胞HCC-LM<,3>的克隆形成能力和侵袭能力的变化;利用国际上首例人肝细胞癌的初鼠自发性转移模型观察TIP30/CC<,3>基因对HCC-LM<,3>细胞在裸鼠体内转移能力的影响.④Western blotting蛋白印迹检测肝癌、乳腺癌、骨肉瘤多种肿瘤细胞内源性TIP30/CC<,3>基因的表达;利用病毒载体将TIP30/CC<,3>基因导入肿瘤细胞,用台盼蓝拒染法、MTT实验检测肿瘤细胞生长增殖的变化;利用形态学观察、"DNA琼脂糖凝胶电泳"、流式细胞仪分析检测TIP30/CC<,3>基因对肿瘤细胞凋亡的影响;并利用RT-PCR技术、western blotting蛋白印迹杂交检测了TIP30/CC<,3>基因与癌基因c-myc和抑癌基因p53之间的关系.⑤建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,在此基础上观察TIP30/CC<,3>基因及合并化疗效5-FU对肿瘤的体内治疗作用.实验结论:①该研究通过观察TIP30/CC<,3>基因对高转移潜能的肝癌细胞HCC-LM<,3>的生长增殖,克隆形成能力及侵袭力的影响,以及在裸鼠自发性转移模型中的作用,结合临床肝癌患者标本中TIP30/CC<,3>基因的表达及临床病理指标的关系,证明TIP30/CC<,3>基因可以抑制肝癌细胞的侵袭和转移能力,是一种肿瘤转移抑制基因.②利用携带TIP30/CC<,3>基因的腺病毒感染p53基因型不同的肝癌细胞及乳腺癌、骨肉瘤多种肿瘤细胞,观察TIP30/CC<,3>基因对肿瘤细胞的生长增殖和凋亡作用的影响,结合动物模型中单独或联合化疗可以抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,延长荷瘤裸鼠的生存期,证明TIP30/CC<,3>基因是一抑癌基因,可作为一种潜在的肿瘤基因治疗候选基因.③通过观察TIP30/CC<,3>基因对p53基因型不同的肿瘤细胞株有不同程度的抑制作用,结合RT-PCR技术、western blotting蛋白印迹杂交检测初步证实TIP30/CC基因对肿瘤细胞的抑制作用可能是通过下调c-myc基因或上调p53基因的结果;其促肿瘤细胞凋亡部分原因是促进p53基因的转录或表达而启动细胞凋亡的线粒体途径.但TIP30/CC3基因对p53缺失和突变的肿瘤细胞同样有抑制作用表明其促凋亡途径可能不仅仅是p53依赖性的.