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糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞eNOS活性和表达的影响

摘要目的:研究糖基化终产物(AGEs)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活性及其蛋白表达的影响.方法:用糖孵育法制备糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA),用胶原酶法分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs).将内皮细胞与不同浓度的AGE-BSA在体外共同孵育不同时间,用同位素二步色谱法检测基础状态下以及组胺刺激后的eNOS活性,用蛋白免疫印迹法(Western-blotting)检测eNOS蛋白表达水平.结果:(1)基础状态下,HUVECs的eNOS有部分激活,组胺刺激后的eNOS活性显著增加.(2)AGE-BSA显著抑制基础状态下的eNOS活性和组胺刺激后的eNOS活性增高,这种抑制作用呈时间、浓度依赖性.(3)AGE-BSA与HUVECs共同孵育24小时后的eNOS表达水平显著降低(P<0.001),且随着孵育时间的延长,eNOS表达水平进一步降低(P<0.05,48h vs 24h),这种抑制作用与AGE-BSA的浓度有关.结论:AGE-BSA显著抑制eNOS基础状态和组胺刺激后的活性增高;AGE-BSA显著抑制HUVECs的eNOS表达;AGE-BSA对eNOS活性的抑制作用可能与降低eNOS表达有关.

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