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β受体激动增加人脐静脉内皮细胞eNOS活性的细胞内机制

摘要目的:β受体激动增加人脐静脉内皮细胞eNOS活性的细胞内机制研究生:蒲娟娟 导师:徐标东南大学医学院心血管病研究所中文摘要目的:β受体激动可增加eNOS活性,但具体机制仍不完全清楚.该研究观察阻断腺苷酸环化酶(AC)、蛋白激酶A(PKA)、三羟基磷脂酰肌醇激酶(P13-K)、酪氨酸蛋白激酶(PTK)后,相应的β-肾上腺素能受体激动增加内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的改变,目的在于阐明β受体调节eNOS活性信号通路中上述这些蛋白激酶的作用.方法:运用同位素两步色谱法([<'3>H]-L-精氨酸转化法)检测eNOS活性.观察AC特异性阻断剂SQ-22536(5×10<'-5>mol/L)、PKA特异性阻断剂H-89(1×10<'-7>mol/L)、PI3-K特异性阻断剂Wortmannin(5×10<'-7> mol/L)、PTK特异性阻断剂Typhostin23(1×10<'-4>mol/L)和Typhostin23无活性衍生物Typhostinl(1×10<'-4>mol/L)与培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)孵育10min,再与异丙肾上腺素(IS0)(1×10<'-6>mol/L)孵育30min后HUVEC的eNOS活性变化.结果:ISO与人脐静脉内皮细胞孵育30min后eNOS活性明显增加;阻断AC、PKA、PI3-K和PTK后,ISO诱导的eNOS活性增加受到抑制,其中以PKA阻断剂抑制作用最为明显.结论:ISO激活eNOS活性的信号通路上,AC、PKA、PI3-K、PTK均有不同程度参与,其中以PKA作用最为显著.

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