换一批
换一批摘要该研究目的在于:研究TRAP在哺乳动物细胞中的表达情况和定位以及与端粒酶活性相关性;检测 TRAP 在肿瘤细胞中突变情况;观察 TRAP 对hTERT表达影响;探讨其对肿瘤细胞生物学特性的影响.主要实验方法及结果如下:1.构建了TRAP原核表达载体,制备并初步纯化了原核表达的融合蛋白TRAP,成功制备了鼠抗TRAP多克隆抗体,确定此多克隆抗体具有TRAP特异性,可以用来特异检测TRAP.2.利用免疫组化方法检测359例人类肿瘤组织和良性病变TRAP基因的表达.结果显示:检测的组织中,TRAP位于细胞核内,恶性肿瘤组织中TRAP表达普遍存在,部份的癌前病变也有表达,而在相应的周围组织以及良性病变中则为阴性或低表达,表明TRAP基因的表达与人类肿瘤的恶性表型相关.同时在部份标本也检测到端粒酶hTERT表达,表明TRAP的表达与hTERT表达结果有一致性.3.利用Southern Blot方法检测TRAP在HeLa和293细胞中的突变情况,结果显示肿瘤细胞中TRAP基因无扩增和易位.4.构建了全长正、反义TRAP真核细胞表达载体,稳定转染HeLa细胞,结果显示,正义TRAP增强了TRAP表达和上调内源性hTERT mRNA表达,端粒酶活性增高;反义TRAP抑制TRAP表达,同时,hTERT mRNA表达下降,端粒酶活性降低.5.对TRAP基因的生物学功能进行了初步分析,稳定转染正义TRAP的HeLa细胞体外实验显示细胞生长加快,转染反义TRAP使细胞增殖受抑;体内实验表明反义TRAP基因抑制裸鼠中肿瘤的生长,部分逆转其恶性表型.
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