换一批
换一批摘要目的:探索活体转染成功的条件,把质粒pBSK5mOVA转入小鼠的皮肤组织内,并且在皮肤组织中表达.为进一步以该质粒所编码的蛋白质作为抗原诱导免疫反应,从而建立动物疾病模型奠定基础.实验材料和方法:1.质粒DNA:质粒pBSⅡ和pBSK5mOVA.质粒pBSⅡ为含有编码大肠杆菌的p-半乳糖苷酶LacZ基因、氨苄青霉素抗性(amp<'r>)基因的质粒载体.质粒pBSK5mOVA为含有人类K5启动子、编码OVA蛋白基因片段、人类生长因子多聚-A(poly-A)的重组质粒.2.动物和菌株:C57BL/6和BALB/C近交系鼠.6-8周龄,体重为15-20克,雄性,均购自中国医科大学实验动物部.菌株:大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)DH5α菌株,由该实验室提供.3.主要的试剂:TRIZOL试剂(Invitrogen公司,美国),Access RT-PCR System试剂盒(Promega公司,美国),lipofectamin<'TM>2000试剂(Invitrogen公司,美国),兔抗鸡卵白蛋白的多克隆抗体(Life sciences公司,美国),RT-PCR引物的设计根据参考文献.4.质粒的扩增、提取及纯化.5.质粒pBSⅡ的活体转染及检测.6.质粒pBSK5mOVA的活体转染及检测.
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