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摘要第一部分 基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)在高氧性肺损伤中的变化目的 高氧机械通气是治疗新生儿呼吸窘迫综合症的重要措施,但长时间吸入高浓度氧又可引起肺氧毒性损伤,导致肺间质纤维化和明显肺发育障碍,是支气管肺发育不良(BPD)的主要致病因素之一.目前认为,细胞外基质(ECM)代谢紊乱参与了急、慢性肺损伤的病理生理过程,作为降解ECM成份最重要的基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMPs)在这个过程中可能发挥了重要的作用.该研究通过建立大鼠急、慢性高氧肺损伤的动物模型,动态观察MMPs、TIMPs的变化规律,探讨MMPs、TIMPs在高氧性肺损伤中的表达和意义.方法 幼年Wistar大鼠32只,随机分为空气对照组(8只)和高氧暴露3、7、14天组(每组各8只),高氧组置于有机玻璃氧仓中,持续输入氧气(2L/min),保证氧浓度≥95％、CO2浓度≤5％.空气对照组置于同一室内空气中(氧浓度=21％),二组环境温度控制在21℃-25℃,湿度60％-70％.高氧暴露3d、7d、14d后取肺组织用免疫组织化学方法(SABC)观察MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在肺组织中分布,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA在肺组织中的表达,此外对支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透系数、肺湿/干重比(W/D)以及肺组织病理学改变也进行了对比分析.结论 1.高氧暴露可引起急、慢性肺损伤,表现为肺水肿、出血、炎性细胞浸润及间质细胞增生、肺纤维化形成.2.高氧暴露后肺组织MMPs、TIMPs mRNA和蛋白的表达均明显增高,说明MMPs、TIMPs参与了高氧肺损伤的病理生理过程.3.MMPs过度激活和表达以及MMPs/TIMPs的失衡不仅参与了急性炎症阶段肺损伤,而且可能是启动肺纤维化的重要机制,从而决定了高氧肺损伤的转归.第二部分 地塞米松对高氧肺损伤大鼠肺组织中基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响目的 高氧肺损伤是利用机械通气治疗呼吸窘迫综合症的过程中面临的非常严重的问题,目前临床上对高氧肺损伤尚无确切有效的防治方法.地塞米松是一种糖皮质激素,具有强大的稳定细胞膜、抗炎的作用,广泛用于肺部炎症性疾病,防止和减轻肺纤维化的形成.近年来在哮喘、特发性肺纤维化等疾病的研究中发现,地塞米松可以影响MMPs、TIMPs的表达,调节MMPs/TIMPs的平衡,阻止病情的进展.但在高氧肺损伤是否也有类似作用,目前还不清楚.该研究通过建立高氧肺损伤的动物模型,采用体外肺组织培养技术,观察地塞米松对肺组织中MMPs、TIMPs表达的影响,探讨地塞米松对高氧肺损伤的保护作用机制.方法 幼年Wistar大鼠16只,随机分为空气组和高氧组各8只(动物模型的制作见第一部分).高氧暴露7天后,将实验大鼠麻醉后放血处死,无菌开胸取肺组织并将其剪成1mm<'3>小块,用预冷的DMEM/F12洗3次,取30块左右置于24孔培养板中.每组8孔,加入DMEM/F12培养基1.5ml,用不同浓度的地塞米松干预(1×10<'-8>M、1×10<'-6>M、1×10<'-4>M),置于5％CO2、37℃条件下的CO2孵育箱中培养24小时.然后收集肺组织,行RT-PCR检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA的表达.结论 地塞米松可下调MMPs、TIMPs mRNA的表达,调节MMPs/TIMPs之间的平衡,可能是地塞米松对高氧肺损伤有保护作用的机制之一.