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摘要该课题将做以下几方面的工作:体外分离、培养、扩增骨髓MSCs,建立骨髓MSCs的体外培养扩增体系;建立心力衰竭(简称心衰)的动物模型;体内移植骨髓MSCs到心衰的动物模型中;由经胸彩色超声心动图(TTE)监测骨髓MSCs植入前后心功能参数的变化;鉴定骨髓MSCs的分化;并初步探讨心功能改善的机制,为骨髓MSCs的临床应用打下基础.方法:该课题采用贴壁分离法,从大鼠的股骨、径骨中分离骨髓MSCs,进行培养、扩增、纯化,在移植前12~24小时,用DAPI标记骨髓MSCs.采用阿霉素腹腔注射,建立心衰的动物模型,并随机分成三组,即心衰组(心衰模型不给予任何干预措施)、对照组(心衰模型植入培养基)、处理组(心衰模型植入骨髓MSCs).骨髓MSCs数量达到(1~5)×10<'6>时,直接移植骨髓MSCs到心衰模型的左心室前壁,术后2、4、6、8周,由TTE监测心功能参数的变化.8周监测完成后,心腔内穿刺取血,分别分离血清、血浆.并取出心脏标本,采用HE染色检测植入骨髓MSCs的形态以及宿主心肌结构的变化,荧光免疫组化检测植入骨髓MSCs肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)和心肌特异性抗原连接蛋白Cx43的表达,同时应用RT-PCR技术检测心脏早期发育基因NKx2.5、GATA-4 mRNA的表达.采用放射免疫法检测三组大鼠血清、血浆中白细胞介素-6(Interleukin-6 IL-6)、内皮素-1(Endothelin-1 ET-1)的变化.结论:1、心衰模型移植骨髓MSCs后,其心功能明显改善,骨髓MSCs可能参与了受损心肌组织的修复与再生.2、骨髓MSCs移植后在体内心肌微环境中可存活、并向心肌细胞方向分化,心肌细胞在诱导分化过程中起重要作用.3、骨髓MSCs移植后可融入中胚层来源的组织器官中,长期观察未见明显的排斥反应,提示MSCs在心肌疾病中的细胞替代治疗具有着广泛的临床应用前景.4、骨髓MSCs移植后ET-1明显升高,与其改善心功能有一定的关系.