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摘要"肾生髓"理论是中医藏象学说的精华观点之一,中医学的现代化发展迫切需要对中医理论中的精华观点进行现代科学诠释.选择现代生命科学所认识到的神经系统不同疾病的共同病理生理机制,从中医学理论补肾健脑的角度对其指导理论——"肾生髓"理论进行重现认识,可能是中医学理论现代诠释较为适合的途径之一.在这种思路的指导下,我们采用中药血清药理学方法,结合体外细胞培养技术,分别从促进PC12细胞增殖和拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤两个角度对经典补肾复方进行了体外筛选.同时设立两组养心方作为对照,以说明中医理论中肾脑关系的独特性.MTT法检测细胞活力的结果显示补肾复方BS不仅可以促进体外培养的正常PC1 2细胞增殖,而且还能够拮抗谷氨酸神经毒作用对PC12细胞的损伤,说明BS具有潜在的神经保护作用.与养心方相比,BS的这种作用在统计学上有显著性差异.BS含药血清的最佳作用浓度为20％,这个结果与中药血清药理学方法学的研究报道一致.在继续的研究中,我们对筛选出的补肾方影响神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化的作用进行了研究,结果显示2 0%浓度的补肾方含药血清具有促进NGF诱导PC12细胞分化的作用.其具体机制尚待进一步研究,推测BS可能通过改善神经细胞赖以存活的微环境而起作用.细胞凋亡被认为是最终导致神经系统功能障碍的主要原因之一.已有的研究结果显示不同神经系统疾病均存在不同程度的神经细胞凋亡,细胞凋亡成为神经细胞发育和功能障碍的主要病理生理机制之一.我们以AnnexinV-FITC/PI荧光指示剂对PC12细胞进行双染色,采用流式细胞术对前述实验筛选出的20%浓度BS含药血清拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的作用进行了研究.结果显示20%浓度BS含药血清能够显著抑制谷氨酸的神经毒作用,拮抗其诱导的PC12细胞早期凋亡,与NMDA受体拮抗剂MK801的作用相似,推测BS可能通过作用于NMDA受体,调控钙通道来抑制细胞凋亡.具体机制尚待进一步研究.钙是细胞内重要的第二信使,胞浆游离钙的变化是联系许多生理病理刺激和细胞内效应器反应之间的枢纽.钙超载被认为是神经退行性疾病最后的公共通路.我们对20%BS含药血清对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响进行了研究,结果显示20%BS含药血清能够显著拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度的过度升高,推测拮抗钙超载可能是补肾方神经保护作用的机制之一,钙离子信号转导通路极有可能是联系中医理论中肾脑关系的关键环节.蛋白磷酸化是机体调节蛋白质生物功能的重要方式之一,也是神经系统中细胞内信号传导途径的主要分子生物学现象,被认为是细胞内信号转导的最基本最重要的公共通路.假设上述推论成立,补肾方又是通过影响哪一条钙信号转导通路的下游通路来实现其神经保护作用的呢?我们选择了神经系统中钙信号转导下游通路中的关键信号蛋白分子钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)作为靶点,研究了20%BS含药血清对其磷酸化的影响.结果显示BS可以抑制在谷氨酸影响下的CaMK Ⅱ过度磷酸化.同时,BS能够降低在谷氨酸影响下CaMKⅡ蛋白总含量的增高,推测这可能与BS影响表达CaMK Ⅱ的相关基因有关,其具体机制有待于进一步研究.结合前述实验结果,提示我们:调控钙信号转导通路关键信号蛋白磷酸化和脱磷酸化之间的稳态可能是补肾中药神经保护作用的关键机制之一.