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摘要为了克隆具有特定功能结构域的新基因,并对所克隆到的新基因的可能功能进行初步研究,我们运用基于基因组数据库的特定基因同源新基因的克隆策略,结合生物学实验RT-PCR的方法克隆得到一个人类新基因WDR70.用生物信息学的方法对克隆到的新基因进行序列分析和蛋白结构域的预测,以推测其可能的功能.同时,还采用了小鼠胚胎整体原位杂交、Nothern blotting等方法来研究新基因的表达情况.另外,为了获得WDR70的表达蛋白,我们还将其克隆到表达载体PQE30中,然后转染感受态大肠杆菌M15并诱导表达以期望能获得相应的蛋白.WDR70 cDNA全长2266bp,编码区序列长1893bp,位于其全长cDNA的187-2079bp的位置,含有起始密码子ATG和终止密码子TGA,是一个完整的编码框.其ATG起始密码周边序列(AACATGG)符合Kozak规律.并且在第一个ATG前方同一相位出现终止密码子.编码的蛋白质含630个氨基酸,包含12个WD40结构域,理论分子量为70x103Dalton,我们将之命名为WDR70(WD40 repeat70).在Human Genome数据库中做BLAST的分析得到WDR70定位在第17号染色体13.1的位置上,包含15个外显子,14个内含子,它们在基因组上的分布跨度约达70kb.在NCBI上BLASTn的分析还发现WDR70与小鼠NM_027963基因具有很高的同源性.Vector NTI Suite 8软件分析两者碱基和氨基酸序列的同源性分别达86﹪和89﹪.说明WDR70可能是小鼠NM_027963基因的同源基因.对WDR70基因的蛋白结构域的分析显示该基因含有12个WD40结构域.这些结构域可以介导蛋白与蛋白之间的相互作用.WDR70蛋白的理论等电点为8.20,没有前导肽区段,是个非分泌型蛋白,亚细胞定位结果为细胞质.另外WDR70蛋白还含有5个可能的N-糖基化位点,7个可能的PKC磷酸化位点,6个可能的酪氨酸激酶磷酸化位点,14个可能的N-十四烷酰化位点.以DIG标记的WDR70的全长编码区的RNA为探针,以小鼠胚胎为模型进行整体原位杂交,结果显示WDR70基因在8.5天小鼠胚胎中没有表达,而在9.5天和10.5天的小鼠胚胎的脑部有特异表达.由此推断该基因对胚胎期脑部的发育有重要的影响.Northern blotting结果显示WDR70基因在人成体组织的肾和睾丸中特异表达,而在成体的脑中没有检测到表达,说明该基因对成体的肾和睾丸组织形成有重要影响.