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摘要天花(smallpox)是一种由痘病毒科正痘病毒属的天花病毒(variola virus;smallpox virus)引起的人类烈性传染病,历史上曾多次在世界各国流行,给人类的生存带来深重灾难.目前,天花已经灭绝了20多年,但是有资料表明,天花生物恐怖袭击和其他相关公共卫生事件仍然在威胁着人类的安全.在天花生物恐怖等相关公共卫生事件发生的时候,快速准确的天花病毒鉴别技术是非常重要的.然而现在这种技术并不充分.常用的电子显微镜观察和鸡胚尿囊绒毛膜接种等方法,很难特异地检测出天花病毒,并把它和其他痘病毒区别开.在这种情况下,该研究建立了一种可以特异检测天花病毒的PCR技术,并且对该PCR检测系统的特异性和敏感性进行了实验.天花病毒基因组的大小有近200kb,而且与猴痘、痘苗等其他正痘病毒基因组有很高的同源性.这为设计其特异的核酸诊断技术带来了一定困难.该研究以公开发表的天花病毒和其他相关病毒的基因组序列为基础,运用生物信息学手段分析病毒基因组,查找到天花病毒基因组上和其他痘病毒都不同源的病毒特异序列,并以该序列为主要靶序列,设计特异性PCR检测系统.除此以外,该研究在正痘病毒DNA聚合酶基因和Hemagglutinin基因的基础上设计了辅助鉴别天花病毒的引物系统.这样,以属特异鉴别和种特异鉴别两个层次的检测,构成完整的病毒特异性PCR检测技术.由于没有真正的天花病毒用于研究,该研究人工合成天花病毒特异序列,并应用重组痘苗病毒技术将它插入到痘苗病毒基因组中.而后,利用该重组痘苗病毒模拟天花病毒进行PCR检测系统的实验.结果表明,该研究所设计的天花病毒特异性PCR检测技术可以特异检测天花病毒,并将它与其他正痘病毒区分开.该PCR系统可以在10<'2~3>pfu的病毒滴度水平上检测到天花病毒.该研究是中国863计划专门项目,对中国防范天花生物恐怖袭击和其他相关公共卫生事件具有巨大意义.