换一批
换一批摘要尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(urokinase receptor,uPAR)基因的表达与肿瘤的侵袭转移密切相关.我们以肺巨细胞癌高转移株95D和低转移株95C为细胞模型,在转录水平探讨了uPAR差异表达的原因,以期为抗肿瘤侵袭转移提供一定的理论依据.为了探讨uPAR基因在转录水平的调控机制,分析该基因的转录调控与细胞侵袭转移的关系,该论文对uPAR基因的转录调控进行了以下的研究:1,Matrigel体外侵袭实验及Western blot检测证实了uPAR基因的表达水平与细胞的侵袭转移能力存在正相关.2,分别用3对引物从两株细胞中拷贝出2238bp的uPAR启动子,测序及瞬时转染实验寻找uPAR启动子序列是否存在引起该基因差异表达的重要突变位点.3,以正常人uPAR基因启动子的荧光素酶报告基因质粒为基础,通过构建系统缺失克隆,瞬时转染细胞并测定荧光素酶报告基因活性,确定影响uPAR基因差异转录必需的启动子区域.4,对影响uPAR基因差异表达的启动子区域做连接体扫描突变,寻找关键的顺式作用元件.5,应用甲基化特异性PCR(Methylation Specific PCR,MSP)方法结合DNA测序分析,uPAR基因启动子中CpG甲基化的状态.6,运用电泳迁移率改变实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)以及RT-PCR实验来检测在两株细胞中,影响uPAR差异表达的反式作用因子的表达情况.
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