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参附注射液对缺氧复氧损伤心肌的保护作用及分子机制研究

摘要研究背景和目的:随着多种血管再通技术在临床的广泛应用,心肌缺血再灌注损伤(Ischemia/reperfusion injury,IRI)已越来越受到广大科研工作者的重视.探索心肌缺血再灌注损伤的机制和防治措施,已成为当今医学研究的热点之一.参附注射液由红参和黑附片提取物组成,主要含有人参皂甙和其它有效成分;是三九药业集团独创产品,属国家中药保护品种.临床广泛用于心血管疾病,尤其是冠心病、心肌梗死等急症,其用药效果除迅速改善心绞痛、心肌缺血症状外,还在于有效保护或改善缺血再灌注损伤心肌,且疗效较好.但关于其作用机制还未见报道.该实验利用SD大鼠的乳鼠培养心肌细胞,并建立心肌细胞缺氧复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤模型,通过细胞存活率、细胞活力、细胞凋亡率、细胞内游离钙离子浓度、细胞内热休克蛋白(Heat ShockProteins,HSPs)70表达量和细胞内核因子-κ B(Nuclear Factor-κ B,NF-κ B)活性变化等指标的检测,观察缺氧复氧对心肌细胞的影响,在此基础上观察参附注射液(ShenFu Injection,SFI)对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用,并对其可能的作用机制进行初步探讨,从而为其临床应用及研究提供理论和实验基础.方法:心肌细胞正常培养5日后分为六组:分别为正常对照组(Control),缺氧复氧损伤模型组(H/R),模型加低、中、高三个浓度的参附注射液组(H/R+SFI<,1>,H/R+SFI<,2>,H/R+SFI<,3>),模型加维拉帕米注射液组(H/R+Ver).分组处理后,台盼蓝染色计数各组细胞存活率,MTT比色法测量各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和细胞内HSP70表达量,双波长荧光分光光度计测量各组细胞内游离钙离子浓度,免疫组织化学方法检测各组细胞内NF-κ B活性变化.结论:参附注射液可提高缺氧复氧损伤心肌细胞的存活率,增加损伤心肌活力,减少损伤后凋亡心肌数量,减轻心肌细胞损伤程度;上述作用在一定浓度范围内呈现剂量依赖关系.参附注射液通过抑制细胞内钙超载、诱导细胞内HSP70表达增加、抑制细胞内NF-κ B激活而发挥其药理作用.

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