换一批
换一批摘要该实验通过研究CTGF反义寡核苷酸对TGF-β<,1>诱导的TEMT及细胞外基质胶原Ⅲ的影响,反证TGF-β-CTGF的致TEMT及纤维化作用,并通过CTGF反义寡核苷酸对CTGF的特异性阻断作用,为RIF的防治提供新的方法.方法:将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白组、TGF-β<,1>组、空脂质体组、反义对照组和反义组,每组设三复孔.经脂质体介导基因转染后,加TGF-β<,1>刺激48h.以RT-PCR检测CTGF反义寡核苷酸对CTGF的阻断作用,以RT-PCR、流式细胞仪和免疫组织化学方法定量及定性检测肌纤维母细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态和超微结构,应用ELISA法分析测定培养细胞上清液胶原Ⅲ的含量.结论:1反义寡核苷酸的阻断作用反向证明,CTGF能诱导肾小管上皮细胞发生肌成纤维细胞转分化,促进细胞外基质胶原Ⅲ的合成,且这种作用是TGF-β的下游效应.2 CTGF反义寡核苷酸能够抑制TGF-β<,1>诱导的CTGF表达,阻止TEMT及细胞外基质的生成.
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