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摘要苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白是一种胞内蛋白,能降解参与诱导调控多种植物病原菌致病基因表达的N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子(AHLs).AiiA蛋白在苏云金芽胞杆菌各亚种中广泛存在,但表达量低,对N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子的降解活力不高;同时由于AiiA蛋白是一种非分泌型蛋白,致使它无法与环境中的N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子直接发生作用,限制了其降解活性的发挥.苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白基因的启动子是一类强启动子,其启动表达的S-层蛋白可形成晶格状覆盖在细胞表面,S-层蛋白N末端的信号肽和S-层同源模体(S-layer homology motif SLH)可用作细胞表面展示载体.该研究试图利用苏云金芽胞杆菌CTC菌株S-层蛋白基因的启动子来增强AiiA蛋白的表达,并利用S-层蛋白表面展示功能将AiiA胞内蛋白带到胞外并锚定在细胞表面,以与环境中的AHLs分子直接作用,提高其降解活性.该研究采用苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa的启动子来增强aiiA基因在细胞内的表达,并对比上述两种表达方式对AiiA蛋白降解AHLs分子活力的影响.该研究选用来自于莫里逊亚种(subsp.morrisoni)的转座子Tn5401上解离酶识别的特征序列(Internal Resolution Sequence,IRS)构建解离载体pBMB5401,以此为操作平台研究两种不同AiiA的表达方式及其组合对AiiA蛋白降解N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子活性的影响,这两种不同表达方式是:利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白在细胞表面表达AiiA蛋白以及利用苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子来增强aiiA基因的表达.该研究还比较了三个重组菌BMBcaiiAR,BMB3aiiAR和BMB3439R对AHLs分子的降解活性以及对胡萝卜软腐欧文氏菌致病性的抑制效果,研究结果表明同时利用杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子和苏云金芽胞杆菌S-层蛋白基因ctc的启动子对aiiA基因进行改造获得的工程菌BMB3439R抗软腐病效果比BMB3aiiAR和BMBcaiiAR好;当SLH-AiiA蛋白和蛋白pro3A-AiiA表达量相当的时候,重组菌BMBcaiiAR比BMB3aiiAR更能有效阻止胡萝卜软腐欧文氏菌感染对马铃薯的侵染,表明利用S-层蛋白把AiiA蛋白带到胞外并锚定在细胞表面有利于其与AHLs分子直接发生作用,更进一步提高降解活性.