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摘要越来越多的证据表明同型半胱氨酸(HCY)是心血管疾病的独立危险因子之一,但其致病的确切病理生理机制尚不完全清楚.血管内皮是覆盖于血管内面的一层单层细胞,内皮细胞(EC)的结构损伤和功能紊乱是心血管疾病的发病基础.研究HCY对EC的损伤对我们了解HCY的致病机理有重大帮助,是目前研究心血管病发生、发展的一个热点.本研究的目的旨在:观察HCY对EC结构的损伤和功能改变,整体把握HCY对EC蛋白质表达的变化.为达到以上研究目的本课题分成以下三部分:(1) HCY对人脐静脉(HUVEC)凋亡的影响:凋亡是不同于坏死的程序性细胞死亡,内皮细胞增生和凋亡的平衡失调可能是动脉硬化(AS)发生的重要原因.培养HUVEC,以传代培养的第2~3代细胞为实验对象,HCY以不同浓度或不同的作用时间进行干预.通过光镜和电镜观察HCY对HUVEC的结构损伤;检测培养上清液中的LDH反映细胞损伤的程度;用细胞四唑盐(MTT)比色方法观察HCY对细胞增殖的影响;以流式细胞仪和细胞基因组DNA电泳方法观察细胞凋亡的发生率.(2)HCY对HUVEC表达TAFI和TFPI的影响:凝血酶激活的纤溶抑制物(Thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)和组织因子途径抑制因子(Tissue factor passway inhibitor,TFPI)是近年来受到国内外高度重视的由血管内皮细胞分泌的生理性凝血调节因子.HCY以不同浓度或不同的作用时间进行干预传代培养的第2~3代HUVEC.通过RT-PCR和Western-Blot方法从mRNA水平和蛋白质水平研究HCY对HUVEC表达TAFI和TFPI的影响.(3)同型半胱氨酸对内皮细胞蛋白质组影响的双向凝胶电泳分析:内皮细胞是覆盖于动脉、静脉、淋巴管等管腔内的单层细胞,对人体的生理与病理变化具有重要作用.HCY对内皮细胞的损伤可表现在对内皮细胞屏障和再生功能的损害、对内皮依赖舒张功能(EDVR)的损害、对内皮抗凝和纤溶功能的损害和对内皮粘附功能的影响等多个方面.本实验揭示HCY对内皮细胞存在多方面的作用,能诱导细胞凋亡,引起细胞功能紊乱,影响细胞蛋白质组.以上这些对揭示HCY的致病机理有重要意义.