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IL-1β对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响

摘要目的:研究白细胞介素-1β(IL-β)对体外培养小鼠2-细胞胚胎发育的影响,以探讨小鼠早期胚胎发育的机制和优化小鼠早期胚胎培养系统,并为进一步优化人类胚胎培养系统提供理论和实验依据.方法:选取8-12周龄、体重为25-30g的雌性未交配的ICR小鼠,腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10IU/只,48h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)10IU/只,注射后小鼠按雌:雄比例1:1合笼.在注射HCG后44h左右用颈椎脱臼法处死雌鼠,迅速将已处死的小鼠放在处理台上,在无菌条件下剪开小鼠腹壁进入腹腔,取出双侧输卵管放入温度已达到37℃的BM Hepes皿中,移入体视显微镜下将受精后达2细胞期鼠胚冲入含M16液的冲洗皿中用微吸管收集鼠胚,放入含M16液的漂洗皿中漂洗两遍后,将鼠胚移入培养液滴中进行体外培养,培养分五组:对照组为不加IL-1β的M16培养液滴,实验组为加IL-1β的M16培养液滴共四组(IL-1 β浓度分别为0.1ng/ml、lng/Ml、10ng/ml、100ng/Ml).本实验采用微滴法培养,每滴含培养液50μ1,每滴中加入5-15个鼠胚.将培养皿迅速放入37℃、5﹪co<,2>培养箱中连续培养共96h.密切观察胚胎生长情况,并计算鼠胚囊胚率和孵出率.结果用x<'2>检验进行统计学分析.结果:实验共收集2细胞期鼠胚652个,随机将胚胎分入对照组和实验组,结果:(1)培养到72h,对照组囊胚率为43.﹪,而四个实验组囊胚率分别为74.1﹪、71.5﹪、70﹪、69﹪,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);但四个实验组间的囊胚率比较,差异无显著性(P>0.05).(2)培养到96h,对照组鼠胚孵出率为34.1﹪,而四个实验组孵出率分别为61.1﹪、56.2﹪、58.5﹪、53.5﹪,其中IL-1 β浓度分别为0.1ng/ml、lng/ml、10ng/ml的实验组,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);但IL-1 β浓度为100ng/ml的实验组孵出率与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);四个实验组间鼠胚孵出率比较,差异无显著性(P>0.05).结论:在本实验研究的IL-1β浓度范围内:(1)IL-1 β可提高体外培养鼠胚的囊胚率.(2)当IL-1 β浓度为0.1ng/ml-10ng/ml时,可提高体外培养鼠胚的孵出率.(3)IL-1 β对体外培养的早期鼠胚未见有毒性作用.所以,本研究认为IL-1 β浓度为0.1ng/ml-10ng/ml是2-细胞鼠胚体外培养的较适宜浓度.

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