检索历史 清除

摘要血浆是血液的一个重要的组成成分,具有重要的生理功能.当人体器官的发生病理损害时可引起血浆蛋白发生质和量的改变,分析这种特征性的变化对疾病诊断和疗效监测具有十分重要的意义.血浆同时又是一个复杂和动态变化的系统,含有种类繁多、丰度各异的蛋白质,给人们的研究工作带来了困难.随着蛋白质组学技术手段的不断丰富和发展,血浆蛋白质组计划的启动,为全面而系统地认识健康和疾病状态下血液循环中血浆蛋白的性质提供了有利的平台.食管鳞癌是我国常见的恶性肿瘤,目前缺乏有效的早期诊断方法.本研究选用不同的蛋白质组学技术手段,分离和鉴定食管鳞癌相关的分泌蛋白/小分子肽"标志物".首先用食管鳞癌患者血清识别食管鳞癌组织和细胞系中肿瘤相关蛋白,富集的候选蛋白经SDS-PAGE分离,使用液相串连质谱(LC-MS/MS)鉴定出食管癌相关蛋白20种.其中,Ku70蛋白经Western blot和免疫组化验证,在食管癌组织和血清中表达明显增强,是食管癌候选的血清标志蛋白.因此使用肿瘤病人自身免疫血清作为分子探针,识别、富集肿瘤相关蛋白,结合蛋白质组学分离和鉴定技术是发现体液肿瘤候选标志分子的新途径.血浆丛集素(clusterin)是用2DE-MALDI-TOF-TOF方法鉴定出来的一种新的分泌型食管鳞癌血清候选标志蛋白,在食管鳞癌血清和组织中表达明显降低或缺失.经基因缺失分析、半定量RT-PCR、Western blot和免疫组化等方法,发现食管鳞癌中clusterin基因存在N端缺失、蛋白水解剪切受阻和未成熟型(核型)clusterin在食管癌上皮中过表达等现象与食管鳞癌发生发展过程相关.白蛋白是血浆中的一种重要的高丰度蛋白,可以作为一种载体与体内的一些潜在生物标志分子相结合,发挥重要的作用.目前血浆蛋白质组学研究常用的一些去除高丰度蛋白的方法通常都忽视了这一重要因素,即在去除高丰度蛋白的同时,也会把这些十分重要的低丰度蛋白带走.本研究利用抗白蛋白抗体免疫沉淀血清中的白蛋白,经SDS-PAGE分离抗原-抗体复合物,经LC-MS/MS分析和鉴定在生理状态下可能与白蛋白结合的蛋白质.共鉴定出10种蛋白质,其中有血浆蛋白1种,另外9种均为组织渗漏进血浆中的蛋白质.这些蛋白质在正常生理状态下与白蛋白结合,有可能成为体内生理变化的指标或潜在的生物标志物.