换一批
换一批摘要9号和22号染色体相互易位形成融合基因bcr/abl,是慢性粒细胞性白血病(CML)的主要发病机制.bcr/abl所编码的融合蛋白p210<'BCR/ABL>具有异常增高的酪氨酸激酶活性,与白细胞的恶性转化密切相关.研究发现,bcr/abl融合基因中bcr基因第一外显子(即bcr/abl的第一外显子bE1)所编码的肽段为激活原癌蛋白c-ABL的酪氨酸激酶活性所必需.本课题拟利用定点打靶系统Cre/loxP系统作用原理,通过同源重组将loxP序列引入CML细胞系K562基因组的bE1两侧,并通过调控Cre酶的表达调控细胞内bE1基因的敲除过程,观察bE1敲除后K562细胞在生长、转移及致癌性等方面的变化,从而为深入阐明CML的发病机理、演变过程、改善治疗方案及估计预后提供有力的理论依据.我们初步建立的可调控性siRNA的表达体系由表达调控蛋白rtTA的表达载体(或细胞系)与含有反应元件TRE的siRNA的表达载体pBS/U6 TRE及其诱导剂组成.PBS/U6 TRE是一种简单的质粒载体,如果在载体中插入某种抗性基因,并将其导入稳定表达rtTA基因的细胞系中,则可能建立起一种稳定的可调控型基因沉寂体系,这一体系对于深入研究基因功能,进一步拓宽RNAi的应用范围将起到良好的推动作用.
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