查尔酮合成酶等黄酮代谢基因的克隆及短葶飞蓬遗传转化研究-论文-万方医学网

查尔酮合成酶等黄酮代谢基因的克隆及短葶飞蓬遗传转化研究

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摘要药用植物短葶飞蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.是提取灯盏花素的主要原料来源，由于大量采挖使野生资源遭到了严重破坏，目前灯盏花药材主产地云南省已开展了人工种植的尝试，但在大规模种植中存在种苗繁殖慢、种质退化等问题。本研究首先利用短葶飞蓬种子消毒后在MSo培养基发芽壮苗建立了快速育苗方法，育苗时间缩短到40～50d。再通过叶柄离体培养经愈伤组织诱导不定芽建立起了一个有效的植株再生体系。可进一步应用于生物技术对短葶飞蓬实施品质改良的研究。本文对短葶飞蓬中活性成分灯盏乙素(黄酮苷)的生物合成途径进行了假设，选取了其中四个相关代谢酶来研究它们在灯盏乙素生物合成中的作用。同时，利用RACEPCR技术从短葶飞蓬叶中首次克隆出了查耳酮合成酶基因(Ebchs)。对该基因及其推导氨基酸序列与菊科其他物种进行比对分析表明它们具有较高的同源性。在农杆菌介导的转化程序中，通过试验确定了潮霉素筛选的浓度为10mg/L，菌液侵染时间不超过10min，共培养时间为2d为宜。利用紫外分光光度计和HPLC，分别测定了短葶飞蓬再生植株不同部位与转基因发根中总黄酮和灯盏乙素含量。转基因发根系中总黄酮和灯盏乙素的含量都要略高于空白对照发根系。