RNAi干扰CXCR4表达对NCI-H446细胞株恶性潜能影响的实验研究-论文-万方医学网

RNAi干扰CXCR4表达对NCI-H446细胞株恶性潜能影响的实验研究

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摘要　　本研究建立了表达CXCR4短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)的表达质粒(pshRNA-CXCR4)，并在脂质体的介导下转染小细胞肺癌NCI-H446细胞株，用G418筛选CXCR4表达下调的细胞克隆。应用MTT试验、流式细胞术、趋化实验(Boyden小室法)、RT-PCR、Westernblot等技术，比较研究了pshRNA-CXCR4转染前后及SDF-1作用前后细胞增殖、细胞凋亡、细胞趋化的变化和对细胞胞浆VEGF、bFGF表达的影响，以及胞浆Ca2+荧光强度、bcl-2、PCNA表达的变化，以探讨pshRNA-CXCR4转染抑肺癌增殖和转移的分子机制。本研究构建在哺乳动物细胞中表达CXCR4shRNA的表达质粒.并初步探讨其对小细胞肺癌NCI-H446细胞株对CXCR4mRNA及蛋白的抑制作用。探讨pshRNA-CXCR4表达质粒转染对人小细胞肺癌NCI-H446细胞株增殖、趋化运动的抑制作用。探讨pshRNA-CXCR4表达质粒转染对人小细胞肺癌NCI-H446细胞VEGF、bFGF表达的影响。探讨pshRNA-CXCR4表达质粒转染对人小细胞肺癌NCI-H446细胞胞浆[Ca+]，bcl-2、PCNA表达的影响。