摘要 本实验采用Percoll不连续梯度密度离心法纯化人外周血PMN;以甲酰三肽(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)和佛波酯(phorbolmyristateacetate,PMA)为刺激物激发PMN脱颗粒;应用酶反应比色法和ELISA法检测PMN颗粒标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、乳铁蛋白(lactoferrin,LF)和溶菌酶(lysozyme,LZ)释放量;在倒置相差显微镜下观察GCs快速抑制PMN脱颗粒的形态学变化;采用放免方法检测PMN脱颗粒胞内cAMP水平;利用Fura-2/AM显微荧光检测技术检测胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)。 本实验表明,大剂量GCs可以通过非基因组机制快速抑制人外周血中性粒细胞的脱颗粒,且胞内cAMP水平的升高、[Ca2+]i的降低是其可能的机制。我们首次提出GCs对PMN脱颗粒的快速非基因组抑制作用,为GCs的抗炎作用及其机制提供了新的思路和基础理论依据。
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