换一批
换一批摘要本文报道aiiA基因在大肠杆菌及Bt中表达的研究结果。 将aiiA基因克隆到表达载体pQE30，并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)M15进行诱导表达。结果表明诱导表达AiiA蛋白的M15菌株对植物病原菌胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwiniacaratovora)SCG1在马铃薯上引发的病害有抑制作用。 对出发菌株Bt-10的AiiA蛋白表达情况进行分析后，发现菌株Bt-10中AiiA蛋白是在早期表达。氨基酸序列分析表明菌株Bt-10中AiiA蛋白仅第154位和第233位氨基酸与最接近的其它Bt菌株中的不同。WesternBlot分析得到的蛋白大小为45KD左右，与序列分析的预期结果28KD不符，估计可能是糖基化或结合了某种小分子物质所致。Bt-10与过夜培养的植物病原菌胡萝卜软腐欧文氏菌E.caratovoraSCG1混合作用1h，能明显抑制软腐现象的发生。 为了提高AiiA蛋白在Bt中的表达量，我们尝试了将aiiA基因的ORF置于cyt1Ab基因的启动子和cry3Aa基因的STAB-SD序列下游，在Bt无晶体突变株4Q7中表达。WesternBlot分析显示重组菌株中有分子量为28KD的AiiA蛋白的表达，且其表达时间延长，表达量增加。与过夜培养的植物病原菌胡萝卜软腐欧文氏菌E.caratovoraSCG1混合作用1h，发现重组菌株对植物病原菌胡萝卜软腐欧文氏菌E.caratovoraSCG1在马铃薯上引起的病害的抑制作用明显高于没有转化重组质粒的4Q7，同时其抑病作用也略高于出发菌株Bt-10。
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