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促血管生成素-1抑制小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的信号转导通路研究

摘要本研究以脑微血管内皮细胞株bEnd.3为研究对象,用无血清培养的方法建立了细胞凋亡的体外模型。实验在该模型中进行。用流式细胞术(PI和AnnexinV双标记)、DNA电泳检测凋亡,使用Westernblot、ELISA、免疫细胞化学(Bcl-2,Bax,Caspase3,Survivin等)检测蛋白水平的变化,用RNA干扰、RT-PCR检测mRNA水平改变。结果表明,无血清培养可诱导bEnd.3细胞凋亡,呈时间依赖性;Ang-1抑制bEnd.3凋亡的机制与Bcl-2、Survivin的表达增强及Bax、Caspase3、Caspase8的表达减弱有关;以下两条通路参加Ang-1抑制bEnd.3细胞凋亡的信号转导:①Ang-1→Tie-2→PI3K→Akt→Bax→Cyt-C→Caspase3②Ang-1→Tie-2→PI3K→Akt→Survivin→Caspase3。

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