换一批
换一批摘要本研究以JG30和CBB23为材料，通过mRNA差异显示技术和基于同源序列的候选基冈法，对抗、感近等基冈系材料接种病原菌后1、3、5、7、10天得到的cDNA进行RT-PCR分析，分离在抗、感近等基冈系问筹异表达的cDNA片段，期望找到与抗病基因连锁或相关的基因片段，为克隆Xa23基因提供条件。 本文通过mRNA差异显示技术获得5个在抗、感近等基冈系间差异表达的cDNA片段；根据STK类抗病基因保守区设计引物，从抗、感近等基冈系中均扩增出一条472bp大小的条带，进行了序列分析；根据NBS-LRR类抗病基冈保守区设计引物，从抗、感近等基因系中扩增出一条500bp大小的条带，测序后获得了2类不同的NBS-LRR类抗性基因同源序列，其中NB1长514bp，电子定位于第11号染色体6978.5K～6979.1K处；NB2长505bp，电子定位于第11号染色体29707.9K～29708.5K处。二者的DNA序列同源性只有30％，但编码的氨基酸序列均具有NBS-LRR类抗性基因的典型保守结构，同源性搜索显示与已克隆的NBS-LRR类抗性基因同源序列有较高的同源性，说明NR1和NB2是NBS-LRR类抗性基因同源片段。它们与抗病性的关系有待获得全长cDNA序列后再进行分析鉴定。 本文根据胞外LRR类抗病基因保守区设计引物，从抗、感近等基因系中获得了2个RGA序列：LR1和LR2。序列分析发现，LR1和LR2不具有LRR类抗病基因的典型保守结构域。推测两片段与目的抗性基因无关，对图位克隆法获得的4个抗病候选基因进行RT-PCR分析，表明4个候选基因在转录水平上均有表达。
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