检索历史 清除

摘要黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)属于白腐担子真菌，是研究木质素生物降解的模式生物，该菌的基因组序列已由美国联合基因研究所测定完成。P.chrysosporium在进入次生代谢时产生2类依赖于H2O2的过氧化物酶—木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)，它们是降解木质素的主要酶类。阐明P.chrysosporium参与进入次生代谢过程中调控基因的表达规律不但有利于理解该菌的木质素降解机理，而且有利于利用这种真菌。本文就P.chrysosporium的次生代谢调控基因的克隆和表达展开了较系统的研究，取得了相应的研究结果。首先，用抑制消减杂交(SuppressionSubtractiveHybridization，SSH)和基因芯片(Microarray)技术研究了黄孢原毛平革菌在低氮培养基中培养48h和72h的基因表达谱。构建了含1728个72h和868个48h特异cDNA克隆的抑制消减文库；然后用巢式PCR法从中分别扩增出1555和767EST片段；将它们点制成基因芯片。用反转录自mRNA的RT探针和来自于cDNA文库的SSH探针分别与芯片杂交。 第二，在Linux系统下构建了一个用生物信息学方法处理EST序列数据的软件平台。利用此平台完成了757个EST序列的载体序列的去除、ESTBlast数据库的构建、EST序列的分类组装、基因组定位和外显子和内含子的识别等过程。并对SSH362、SSH2230进行了基因预测和蛋白模型构建。 　　最后，用DNA-蛋白质体外结合实验和电泳迁移率转换技术分析了黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因lipA、lipC、lipF的启动子及5’-端上游区域的11个DNA片段的功能。这些研究结果为最终阐明P.chrysosporium次生代谢机理打下了坚实的基础。