布洛芬立体拆分菌株的离子束诱变选育及酶学特性研究-论文-万方医学网

布洛芬立体拆分菌株的离子束诱变选育及酶学特性研究

二维码有效期 120s

收藏纠错

摘要本文利用传统的微生物学方法，筛选到具有立体选择性水解布洛芬乙酯生成S-(+)-布洛芬的菌株T。通过观察T菌株的表型、生理生化及分子生物学实验，测定核糖体的ITS区和核糖体26SrDNA的D1/D2序列，鉴定该菌株为：Trichosporonlactis.能量30keV、剂量为1～5×1015ions/cm2的离子注入诱变TrichosporonlactisT，筛选到高产且遗传较为稳定的诱变株K1。文章对诱变株K1的摇瓶培养和水解条件进行了优化，考察了K1菌株在10L发酵罐中溶氧、pH对菌体生长及水解产量的影响。研究显示，TrichosporonlactisK1立体选择性水解布洛芬乙酯的酶为脂肪酶，且该脂肪酶不是胞外酶。酶的最适反应温度是28℃，通过对酶反应温度范围的考察，发现酶的热稳定性较差，但在50℃时，短时间内仍可发挥催化作用。酶的pH稳定范围在7.5～10.5，最适pH为7.5～8.0。金属离子Cu2+、Fe2+、Fe3+有抑制酶活力的作用，Mg2+、Ca2+对酶活性影响较小。该脂肪酶的等电点在pH3.5，用SDS-PAGE测得酶蛋白的分子量为29870。