检索历史 清除

摘要本研究采用BSA(BulkedSegregantAnalysis)法结合RAPD(RandomlyAmplifiedPolymorphicDNA)分子标记技术以苹果三个杂交组合：舞姿×嘎拉、舞姿×短枝富士、舞姿×新红星的F1杂交群体为试料，寻找苹果果皮红色性状的分子标记。研究结果如下：1.采用改良的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法，以苹果休眠芽为试料提取苹果基因组DNA。DNA质量经0.8％琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明提取的DNA条带完整、质量高、PCR扩增条带清晰、条带数适中、且重复性好。2.根据分离群体分组分析法的原理，组成了两个对比基因池，即红色池和非红色池。每个池包含来自舞姿×短枝富士杂交组合的10个F1个体，这10个个体除了在红色或非红色果皮色泽上具有差别之外，其它的性状都是随机的。筛选了355条10bp随机引物，共扩增出2783条清晰地DNA带，平均每条引物扩增7.8条DNA带。其中有14个随机引物没有扩增出产物，占总筛选引物的3.9％。分离群体分组分析初步筛选出49个多态性引物，通过进一步在群体上进行验证，最终获得4个多态性标记，即S1289、S1235、S2107及S519，它们都能扩增出与红色性状相关的标记。S1235、S2107、S519均能在红色池上和红色个体上扩增出一条多态性条带，而S1289能在非红色池和非红色个体上扩增出一条多态性条带。估计S1289、S1235、S2107及S519扩增出的多态性片段的大小分别为：1200bp、1000bp、1200bp及1000bp。它们对F1群体色泽验证的符合率分别为：73.3％、71.7％、73.3％及71.7％。3.鉴于获得的多态性标记对果皮色泽判断的符合率不高，存在较大误差的现状，我们提出了双引物组合分析的方案。该方案只对双标记交换类型个体进行淘汰，这样使得获得的标记对色泽性状预测的准确率大幅度提高。群体上的分析表明，每个双引物组合对色泽判断的正确率均在90％以上。其中S1289-S2107标记组合可使红色性状预测的准确性达到98.3％，对色泽判断的正确率从单个引物的73.3％提高到98.3％。S2107-S519标记组合可使红色性状预测的准确行达到95％，对色泽判断的正确率从单个引物的73.3％和71.7％提高到95％。4.另外，将获得的4个多态性标记在几个栽培品种上进行了扩增，分析了它们在这些品种上的表现，大多数品种的表现与理论一致。5.据Cheng(1996)报道的一个与果实颜色相关的序列，合成了一对通用性引物。并在F1群体及几个栽培品种上进行了扩增，结果表明该标记F1群体色泽判断的误差率为11.7％。