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摘要随着免疫学的发展和免疫机制在白血病发生发展中作用的逐步阐明，免疫学技术、方法和原理在白血病诊疗中发挥越来越重要的作用。本文对抗白血病肿瘤疫苗和新型白细胞介素在造血系统中的作用进行了若干探索，取得了新的进展。 第一部分：小鼠β-防御素2瘤苗的构建及抗白血病L1210作用的研究 天然免疫一度被认为只是免疫系统应答外界刺激的低级形式，近年研究发现天然免疫对获得性免疫起直接的激活和导向作用。天然免疫通过模式识别受体(PRR)作用赋予获得性免疫识别“自己”和“非己”的能力。最近研究发现天然免疫抗菌肽小鼠β-防御素2(MBD2)不仅能够趋化不成熟树突状细胞(iDC)，还可通过PRR激活DC成熟，产生一系列前炎症细胞因子、趋化因子，上调共刺激分子，可能是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁。我们将MBD2转染小鼠淋巴细胞白血病L1210细胞，制备细胞瘤苗观察其抗白血病免疫效果。首先用RT-PCR法从LPS刺激的小鼠皮肤细胞克隆MBD2成熟部分基因片断，用overlapPCR法将小鼠Igk信号肽与MBD2成熟片断相连，构建MBD2分泌表达载体(pMBD2)，经测序证实序列正确后，脂质体法将空载体及pMBD2分别转染L1210细胞，获得稳定表达细胞系(分别命名为L1210-p和L1210-MBD2)。Westernblot证实转染的肿瘤疫苗细胞可以表达并分泌MBD2。用Transwell检测瘤苗细胞培养上清对不成熟DC迁移的作用，证实瘤苗细胞表达的MBD2有功能活性。生长曲线和细胞周期实验证实与未转染的肿瘤细胞相比，转染空载体和pMBD2对肿瘤细胞生长增殖无明显影响。FACS检测MHCⅠ(H-2Kd，H-2Dd)，MHCⅡ(I-Ad)分子，共刺激分子CD80、CD86表达发现，与未转染的L1210细胞相比，转染空载体或pMBD2后，L1210细胞上述分子的表达亦无明显改变。随后进行小鼠体内抗白血病效果评价。体内致瘤性实验和免疫保护实验结果显示，L1210-MBD2瘤苗能显著降低L1210细胞的致瘤性，80％小鼠长期生存；经野生型L1210二次攻击后全部小鼠仍然长期生存，并产生肿瘤特异性CTL。荷瘤小鼠皮下注射MBD2照射瘤苗，观察其治疗效果，结果表明：照射瘤苗治疗能明显延长荷瘤小鼠生存期，50％小鼠达到长期生存。抗肿瘤机制研究显示，接种L1210-MBD2瘤苗能显著增强小鼠脾脏淋巴细胞的NK、CTL杀伤活性，IFN-γ水平亦有明显升高。抗体删除实验显示，所有CD8+T及NK细胞删除小鼠接种L1210-MBD2后均发病死亡，而删除CD4+T细胞亚群对L1210-MBD2的抗肿瘤活性无影响，提示NK细胞和CD8+T细胞为其抗肿瘤活性所必需，但不需要CD4+T细胞参与。由于急性淋巴细胞白血病往往表现对NK细胞高度耐受，本文发现MBD2介导的抗小鼠淋巴细胞白血病需要NK细胞可能具有重要意义。 上述实验结果表明，MBD2转基因瘤苗具有明显的抗小鼠白血病L1210效应，能同时激活天然免疫(NK细胞)和获得性免疫(T细胞)，为淋巴细胞白血病的免疫治疗开拓了新的思路。 第二部分：白介素-23和-12亚基在人外周血单个核细胞及造血细胞系中的表达与调控 IL-12是由p35和p40两个亚基组成的异二聚体细胞因子，IL-12及其诱导的IFN-γ在Th1免疫反应的分化发育中起关键作用。IL-23是新发现的异二聚体细胞因子，结构与IL-12相似，由IL-12p40亚基和一个新的p19亚基组成。迄今，人类外周血单个核细胞(PBMC)IL-23亚基表达的诱导剂和调控模式尚不清楚。本文检测各类细胞因子、细菌产物、丝裂原对PBMC及造血细胞系IL-23、IL-12表达的刺激作用，并探讨脂多糖(LPS)和金黄色葡萄球菌(SAC)诱导IL-23表达的作用机制。发现，正常人PBMC表达IL-23p19和IL-12p35mRNA，LPS、SAC均可上调PBMCIL-23及IL-12各亚基的表达水平。LPS诱导的IL-23和IL-12各亚基表达均需通过CD14；但是，CD14仅部分参与SAC诱导的IL-12p40和p35表达上调，而与p19上调无关。LPS和SAC诱导的IL-23和IL-12各亚基表达均需要p38MAPK通路。上述结果为单独或同时调控这两种因子的表达提供线索。此外，植物血凝素(PHA)可促进CD4+、CD8+T细胞IL-23p19表达，而对IL-12p35、p40表达无调节作用。干扰素-γ(IFN-γ)预处理后予LPS刺激可使单核细胞IL-23p19，IL-12p35和IL-12p40表达高于LPS直接作用的表达水平。检测的大多数白血病细胞系均表达p19mRNA，p19比p35表达更为普遍；而p40仅在EB病毒感染的LCL和J6-1细胞中测到。佛波二酯可以提高EB病毒阳性细胞系中p19，p35和p40的表达水平，提示IL-23与IL-12类似，在白血病细胞系中的表达可能与EB病毒感染相关。本研究结果表明，IL-23两个亚基的表达均易受各类诱导剂调节。IL-23p19的表达和调控模式与IL-12p35既有相似之处，又存在不同点。对IL-23和IL-12表达和调控进行对比研究有助于阐明和区分IL-23与IL-12的生物学作用。