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摘要目的:使用RNA干扰技术抑制人肾癌细胞端粒酶活性，探讨其用于肾癌治疗的可行性。 方法:1.根据端粒酶催化亚基(hTERT)及端粒酶RNA(hTR)序列，设计并合成针对其基因编码区的小干扰RNA(siRNA)各一对，另设阴性对照小干扰RNA(negativecontrol)一对，长度均为21个碱基(21nt)，HPLC纯化。 2.siRNA专用脂质体siPORTTMlipid与不同浓度的siRNA结合，再与专用培养基opti-MEMI混合形成siRNA-脂质体-optiMEMI混合物后转染786-0细胞。 3.体外培养肾癌7860细胞株。 4.治疗组分为hTERTsiRNA组及hTRsiRNA组。依浓度分为10nM、50nM、100nM；并设对照组分别为生理盐水组，脂质体组，100nM阴性对照组(neg-control)。 5.逆转录—聚和酶链反应(RT-PCR)法、原位杂交法检测hTERT及hTRmRNA表达。 6.免疫印迹法(Western-blot)、免疫细胞化学法检测检测hTERT蛋白表达。 7.TRAP-ELISA法检测端粒酶活性。 8.计算不同时间点细胞数，绘制细胞生长曲线。 9.CCK-8试剂盒检测细胞增殖 10.免疫细胞化学原位末端缺口标记(TUNEL)法检测凋亡。 结果:一、hTERTsiRNA抑制hTERT基因表达结果：1.mRNA水平：①RT-PCR：100nMsiRNA治疗组(50.3±5.1)％，与阴性对照组(97.3±9.9)％相比，差异显著；其与50nMsiRNA治疗组(71.2±6.3)％相比，差异显著，存在浓度依赖性。100nMsiRNA24h治疗组(50.3±5.1)％与100nMsiRNA48h治疗组(60.7±4.9)％相比，差异显著，存在时间依赖性；②原位杂交：100nMsiRNA治疗组(49.1±5.0)％，与阴性对照组(99.7±9.4)％相比，差异显著；100nMsiRNA(49.1±5.0)％治疗组与50nMsiRNA治疗组(68.4±6.1)％相比，差异显著，存在浓度依赖性。 2.蛋白水平：①Western-blot：100nMsiRNA治疗组(48.1±4.2)％，与阴性对照组(96.8±8.5)％相比，差异显著；其与50nMsiRNA治疗组(79.4±7.1)％相比，差异显著，存在浓度依赖性。100nMsiRNA(24h)治疗组(48.1±4.2)％与100nMsiRNA(48h)治疗组(58.1±5.6)％相比，差异显著，存在时间依赖性。②免疫组化：100nMsiRNA治疗组(48.1±4.2)％，与阴性对照组(96.8±8.5)％相比，差异显著；其与50nMsiRNA治疗组(79.4±7.1)％相比，差异显著，存在浓度依赖性。 二、hTRsiRNA抑制hTR基因表达结果：①RT-PCR：100nMsiRNA治疗组(58.8±4.6)％，与阴性对照组(98.5±9.4)％相比，差异显著；其与50nMsiRNA治疗组(74.9±8.7)％相比，差异显著，存在浓度依赖性；其与100nMsiRNA(48h)治疗组(69.9±7.1)％相比，差异显著，存在时间依赖性。 ②原位杂交：100nMsiRNA治疗组(50.2±4.8)％，与阴性对照组(100.8±10.5)％相比，差异显著；其与50nMsiRNA治疗组(71.5±6.9)％相比，差异显著，存在浓度依赖性。 三、hTERT(hTR)siRNA抑制端粒酶活性结果：与阴性对照组(1.31±0.20)比较，hTR治疗组(0.75±0.09)、hTERT治疗组(0.41±0.05)及合用组(0.37±0.03)均能有效降肾癌786-0细胞的端粒酶活性，各治疗组之间比较，hTR组小于hTERT组和合用组，而后两者比较无统计学意义。 四、hTERT(hTR)siRNA抑制786-0细胞增殖结果：与阴性对照组(2.6±0.9)％比较，hTERT(hTR)siRNA治疗组(10nM,50nM,100nM)肾癌786-0细胞生长抑制率分别为(11.0％，43.2±1.7％，64.5±1.6％)，(10.4％,40.2±1.5％，61.6±1.1％)，差异显著，存在浓度依赖性。从生长曲线图可见，以24小时抑制最显著。 五、hTERT(hTR)siRNA促进786-0细胞凋亡结果：与阴性对照组(10.6±1.5)％相比，hTERT(hTR)siRNA治疗组(10nM,50nM,100nM)肾癌786-0细胞凋亡率为(13.6±2.7％，33.7±7.3％，37.4±6.6％)；(12.9±24％，26.8±5.8％，37.4±0.6％)，差异显著，存在浓度依赖性。 结论:1.hTERTsiRNA能够抑制肾癌786-0细胞hTERT基因的表达，表现hTERT的mRNA下降，hTERT蛋白表达下降，进而下调细胞的端粒酶活性，导致肿瘤细胞生长延缓，凋亡增加，存在时间剂量依赖性。 2.hTRsiRNA能够抑制肾癌786-0细胞hTR基因的表达，表现hTR的mRNA下降，进而下调细胞的端粒酶活性，导致肿瘤细胞生长延缓，凋亡增加，存在时间剂量依赖性。 3.同hTR相比，hTERT在抑制肿瘤生长，促进肿瘤细胞凋亡及下调细胞的端粒酶活性等方面更有效。合用后效果更好。