检索历史 清除

摘要运动发酵单胞菌(Zymomonasmobilis)属于革兰氏阴性细菌，微好氧生长。它对糖的摄取速度和发酵生成乙醇的速度均优于传统酿酒酵母，但其可利用的碳源仅为葡萄糖、果糖和蔗糖。对Z.mobilisCP4进行基因工程改造，使其能代谢木糖生产乙醇，是本中心的一个大课题，本工作是其中一部分，即克隆E.coliK-12talB，并使其在Z.mobilisCP4中表达。 首先从E.coliK-12克隆了talB基因，并利用PCR重叠延伸技术将E.coliK-12talB基因自身的启动子换成Z.mobilisCP4eno的启动子，得到Peno-talB基因，分别与穿梭载体pZB1连接，得到质粒pZB1-talB、pZB1-Peno-talB。测定了转化子E.coliDH5α(pZB1-talB)和E.coliDH5α(pZB1-Peno-talB)无细胞粗提液中转醛醇酶的酶活。结果表明，两个转化子的酶活水平相当，分别为0.106、0.109U/mg蛋白，均比对照菌株E.coliDH5α(pZB1)的酶活高一倍左右(为0.05U/mg蛋白)。 将pZB1-talB和pZB1-Peno-talB分别转化Z.mobilisCP4，并测定了不同培养时间转化子无细胞粗提液中转醛醇酶的酶活。结果如下：ZmobilisCP4(pZB1-talB)在培养16h、20h和24h时的转醛醇酶酶活分别为0.038、0.054、0.059U/mg蛋白；ZmobilisCP4(pZB1-Peno-talB)的转醛醇酶酶活分别为0.03、0.038、0.051U/mg蛋白；野生型的Z.mobilisCP4没有检测到转醛醇酶酶活。表明从对数后期到稳定期，talB和Peno-talB在Z.mobilisCP4中的表达水平是逐渐增加的;且talB基因自身启动子能被Z.mobilisCP4很好识别并启动转录。对Z.mobilisCP4(pZB1)、Z.mobilisCP4(pZB1-Peno-talB)的生长情况的初步研究发现，转醛醇酶的表达对其生长有一定的影响。