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木霉菌剂防治人参根部病害研究及木霉田间种群动态监测

摘要本文针对人参根部病害主要病原菌锈腐菌(Cylindrocarpondestructans)、立枯病菌(Rhizoctoniasolani)、疫霉(Phythphoracactorum),对中国科学院微生物所提供的具有潜在拮抗作用的10株木霉进行筛选,并对筛选到的木霉进行了部分生物学特性及抑菌机制研究、可湿性粉剂研究、田间种群动态研究及菌剂田间防治人参根部病害研究,实验设置及结果如下:一、拮抗木霉的筛选研究采用土壤浸液培养基培养法、PDA培养基培养法和平板对峙培养法,对10株木霉进行比较。结果显示,绿色木霉(TrichodermaviridePers.)Tv04-2、哈茨木霉(TrichodermaharzianumRifai.)Th3080在两种培养基上均能良好生长。Tv04-2在土壤浸液培养基、PDA培养基上的生长速度分别为1.80±0.01、2.15±0.08cm·d-1;Th3080的生长速度分别为1.63±0.02、2.45±0.01cm·d-1,优于其他木霉菌株。 Th3080、Tv04-2的抑菌效果较高。Tv04-2对R.solani、C.destructan、P.cactorum的抑制率分别为76.25%、73.94%、99.54%,Th3080对R.solani、C.destructan、P.cactorum的抑制率分别为67.28%、78.55%、96.19%。 二、绿色木霉Tv04-2与哈茨木霉Th3080部分生物学特性及主要抑菌机制研究比较了Tv04-2与Th3080在3种光照条件,8种pH值,4种杀菌剂的5个浓度下的生长情况。结果表明,纯黑暗条件下Tv04-2及Th3080生长快于其他光照条件。Th3080与pH值在4.5~8.0的范围内线性相关,相关方程为Y=-0.3707X+4.1432,相关系数R2=0.9141。Tv04-2与pH值之间不存在线性相关,pH值为5.0时生长速度最大。两种木霉对苗菌敌、百菌清、代森锰锌三种杀菌剂敏感,对菌虫绝霸的敏感性较低。Th3080在菌虫绝霸浓度降到320μg/ml时,完全不受抑制,可快速生长,Tv04-2对菌虫绝霸完全不敏感。 木霉可对R.solani发生重寄生作用,对C.destructans与P.cactorum未观察到重寄生现象的发生。两种木霉均可通过产生某种或者某些挥发性物质抑制三种病原真菌的生长。Th3080产生的挥发性物质对C.destructans的抑制作用最强,对P.cactorum最弱,而Tv04-2产生的挥发性物质对R.solani的抑制力最强,对P.cactorum次之。 三、木霉可湿性粉剂及其保存条件研究两种木霉可湿性粉剂的制备流程为:斜面种子——平板种子——液体种子——固体发酵培养——烘干——粉碎——添加助剂——检验——包装。其中主要对固体发酵培养的培养基和培养条件进行了筛选。Tv04-2的固体发酵培养基组合为玉米粉40g,麦麸10g,水40%,FeSO4·7H2O10g/kg,光照条件为24h光照(照度为12000Lux)。Th3080的固体培养基为玉米粉40g,麦麸10g,水30%,FeSO4·7H2O0.1g/kg,光照条件为12h光照(照度为12000Lux)12h黑暗交替。两种木霉的接菌量为每10g固体培养物接1ml孢子含量为108的悬浮液,25℃下透气培养28d。 木霉的培养基质玉米粉和麦麸可直接作为载体。木霉Tv04-2助剂组成为甲基纤维素2‰,司本20≤0.1%。木霉Th3080助剂组成为糊精5‰,司本20≤0.01%。 长时间高温、光照和潮湿是导致分生孢子死亡的主要原因,保存时应加以避免,4℃、遮光、密封是最佳保存条件。 四、木霉田间种群动态研究及回收毒力测定木霉田间种群动态研究设3组实验,包括Tv04-2(A)、Th3080(B)及两者混合(AB)。各组下设5种处理:8g·m-2、16g·m-2、24g·m-2、16g·m-2+几丁质1g·m-2、16g·m-2+消毒麦麸20g·m-2。结果表明,各处理种群变化在3处实验地不尽相同。在北京药植所与北京怀柔实验地,木霉施入后的前10d种群数量急剧下降,平均下降到初始投入菌量的10.3%,而在吉林省抚松县实验地,木霉施入后前30d种群数量除A1、A2外,均呈现明显的增加趋势。 150d检测时各处理的木霉种群数量与初始投入的木霉数量的比率均在10%以上,其中B2几高达30%以上,这说明木霉施入土壤后可以长期存活。木霉种群动态与土壤含水量的变化有一定的相关性。几丁质和麦麸对木霉种群数量的保持有一定促进作用,但效果不显著。 Tv04-2在人参地土壤中经历4~6个月后,对三种人参病原菌的抑制率与原始菌种相比无显著变化。Th3080稳定性不如Tv04-2,其对人参病原菌的抑制能力有的弱化,有的增强。 五、木霉菌剂田间防治人参根部病害研究设Tv04-2(A)、Th3080(B)两组实验,蘸根(Z)、浸种(J)、沟施(G)三种使用方法。其中,浸种、蘸根设置5个浓度:×100、×1000、×5000、×10000、×50000,沟施设3个浓度:0.1g·m-2、1.0g·m-2、10g·m-2。另设空白和50%多菌灵可湿性粉剂(2g·m-2)对照。结果显示,蘸根、浸种法优于沟施法。A2、A3、B2、B3不仅能提高人参种苗成活率及人参种子的出苗率,如A2、A3将人参种苗成活率及种子出苗率分别提高33.0%和16.0%以上,而且能将人参根部病害发病率控制在5.0%以下,优于多菌灵对照(15.0%)。

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导师 丁万隆
学位信息:
中国协和医科大学北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部 药学 生药学(硕士) 2006年
分类号 S435.675
发布时间 2006-11-17
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