检索历史 清除

摘要真核基因的转录调控与染色质修饰、激活剂以及转录因子对靶基因的调控有关。本实验室以前用cDNA微阵列的方法识别了一组分化相关基因如富含脯氨酸的蛋白(SPRRs)、角蛋白(keratins)、cystatinA和involucrin在食管癌中表达明显下调，但这些基因的下调机制仍不清楚。 分析发现这些基因启动子区均含有AP-1结合位点，为了研究转录因子AP-1是否调节食管癌中这些分化相关基因的表达，阐明分化相关基因在食管癌中下调的可能机制，首先检测了c-Jun在食管癌配对组织中的表达，结果表明c-Jun在食管癌组织中表达下调，这提示转录因子c-Jun下调可能与这些分化相关基因在食管癌中低表达有关。 TPA是PKC的激活剂，PKC激活后可引发MAPK级联反应，磷酸化激活c-Jun。研究表明，KYSE450细胞c-Jun表达水平较低，对TPA刺激敏感，因此选择KYSE450细胞作为模型，用TPA及各种MAPK抑制剂诱导或抑制c-Jun的表达及活性。TPA明显诱导了c-Jun/AP-1DNA结合活性和反式激活活性，进而促进了分化相关基因的转录和蛋白表达。 为进一步探讨c-Jun/AP-1调控分化相关基因的可能通路，用PKC、JNK和MEK特异性化学抑制剂降低c-Jun的表达和活性。Westernblot结果表明，PKC抑制剂(GF109203X)和JNK抑制剂(SP600125)显著降低了TPA诱导的c-Jun的表达和磷酸化活性，同时也降低了分化相关基因keratin4和involucrin的表达。电泳迁移率变动分析(EMSA)和荧光素酶报道系统分析表明，GF109203X和SP600125显著抑制了TPA诱导的c-Jun/AP-1与靶基因的结合活性和反式激活活性，而MEK抑制剂(PD98059)的作用不明显。 为进一步确定c-Jun对分化相关基因的调节，用染色质免疫共沉淀分析(ChIP)证实了分化相关基因SPRR1A、SPRR2A、SPRR3、keratin13、involucrin和cystatinA是c-Jun和c-Fos的靶基因，双荧光素酶报道系统发现c-Jun显著激活这些靶基因的启动子活性，因此，TPA通过激活c-Jun/AP-1与分化相关基因启动子区结合促进了靶基因转录。 c-Jun位于MAPK通路的终末，是各种信号网络调控的枢纽，本研究发现c-Jun/AP-1在食管鳞癌细胞KYSE450中主要通过PKC/JNK途径激活一组分化相关基因的转录和表达。这将有助于阐明食管癌的分化过程，为食管癌的治疗提供新的药物靶点。