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摘要厌氧菌细胞外膜中的内毒素脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是厌氧菌的主要毒力因子。大量研究表明，LPS通过CD14、TLR4等信号受体使靶细胞活化，释放炎症因子，从而导致或加重炎症反应。单核细胞、巨噬细胞等为CD14、TLR4高表达细胞。在牙周病研究中发现，炎症牙龈组织中有CD14、TLR4表达，牙龈成纤维细胞在受到LPS刺激后也能表达CD14、TLR4，因此证明CD14、TLR4在牙周炎的发生、发展中可能起重要作用。牙髓病、根尖周病是危害人类健康的最常见的疾病之一，与牙周感染类似，属于以革兰氏阴性(G-)厌氧菌感染为主的混合感性疾病。牙髓和根尖周组织在LPS侵袭过程中，是否通过CD14、TLR4信号途径激活牙髓和根尖周组织细胞，是单一通过CD14或CD14/TLR4共同作用等，目前尚未见报道。 本研究采用免疫组织化学染色、流式细胞术等方法，从组织学和细胞学水平研究LPS信号受体CD14、TLR4在牙髓炎和根尖周炎发病过程中的作用，为研究LPS在牙髓炎和根尖周炎中的作用机理提供实验依据。 研究目的研究炎症牙髓组织、根尖周组织和牙髓成纤维细胞中LPS信号受体CD14、TLR4的表达特点，探讨牙髓和根尖周炎症中LPS的信号转导途径。 研究方法1、取临床新鲜拔除的人正常和炎症的第三磨牙牙髓组织，采用免疫组织化学染色观察健康和炎症牙髓组织中CD14、TLR4表达情况；建立大鼠根尖周炎症模型，采用免疫组织化学染色观察CD14、TLR4在正常及炎症根尖周组织中的表达及分布情况。 2、通过体外培养原代人牙髓成纤维细胞，采用免疫组织化学染色观察人牙髓成纤维细胞在LPS刺激前后CD14、TLR4表达情况；采用流式细胞术直接免疫荧光标记法检测人牙髓成纤维细胞在LPS刺激前后CD14、TLR4阳性细胞率和细胞表面平均荧光强度，分析CD14、TLR4在牙髓成纤维细胞的表达特点。 研究结果1、正常牙髓组织和根尖周组织中未见明显CD14、TLR4阳性细胞；炎症牙髓和根尖周组织中可见大量CD14、TLR4表达阳性细胞，阳性染色多为单核细胞和巨噬细胞。CD14、TLR4阳性细胞率无显著性差异。 2、体外成功培养原代人牙髓成纤维细胞，为下一步的研究提供了有利的前提条件；牙髓细胞经LPS刺激后TLR4呈阳性表达，TLR4平均荧光表达强度和TLR4阳性细胞率显著增高，而CD14在LPS刺激前、后均无表达。 结论本研究结果表明，与正常牙髓组织和根尖周组织相比，炎症组织中CD14和TLR4表达显著增强，并且CD14和TLR4在表达量上无显著差异，提示LPS可能通过CD14、TLR4信号受体在牙髓炎症和根尖周炎症中发挥作用，但可能主要是通过免疫细胞起作用；作为牙髓组织的主体细胞——牙髓成纤维细胞在LPS刺激后细胞膜上无CD14仅有TLR4的表达，表明LPS对牙髓成纤维细胞可能通过TLR4发挥作用。 本研究为进一步研究牙髓、根尖炎症损伤机制和LPS在牙髓细胞的信号转导奠定了科学的实验基础，也为预防和治疗牙髓、根尖周疾病提供了新的思路和实验依据。