换一批摘要本文研究目的：构建带有转膜结构域Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白基因，在大肠杆菌中进行表达，纯化，并对纯化产物的亲和活性和内化作用进行分析。 研究方法：设计引物将Arg9的编码序列分别引入ScFv14基因的5'端、EGFP基因的5'端和3'端，进行PCR扩增。将测序正确的ScFv14基因和R9/ScFv14基因分别与R9/EGFP、EGFP/R9和EGFP基因连接后克隆入原核表达载体pET32a，转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS原核诱导表达，用Ni-NTA柱进行纯化后，用间接ELISA方法检测表达产物与HBsAg的亲和活性，并用间接免疫荧光检测纯化蛋白的内化活性。 研究结果：经测序表明，扩增的目的基因序列正确，经酶切鉴定证实成功构建了带有转膜结构域Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS后用IPTG诱导表达，SDS-PAGE证实四种融合蛋白被成功表达，表达量分别占菌体总蛋白的25％、20％、30％和25％。间接ELISA检测证实四种融合蛋白均具有HBsAg结合活性，用Ni-NTA柱纯化后，间接免疫荧光检测显示Arg9位于N端的融合蛋白有较强的内化作用，而且能特异性的内化进入HbsAg阳性的HepG2.2.15细胞。 研究结论：成功构建、表达和纯化了SeFv14/EGFP融合蛋白和三种带有Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白，纯化产物均具有与抗原HbsAg结合的活性，N端带有Arg9的融合蛋白对靶细胞有较强的内化作用。
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