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摘要血友病A(HemophiliaA，HA)是最常见的遗传性出血性疾病，发病率为1/5000-1/10000，遗传特点是男性发病，女性携带。血友病A的病因是由于凝血因子Ⅷ(FactorⅧ，FⅧ)基因缺陷引起FⅧ含量不足或功能缺陷，导致凝血障碍。临床表现为全身各部位的出血，以皮肤、粘膜及关节肌肉多见，严重的关节、肌肉反复出血常导致畸形，重要脏器出血可危及生命。由于目前尚无有效的根治措施，所以携带者检测及早期产前诊断切断遗传途径、降低血友病发病率是最行之有效的方法。 因子Ⅷ(FactorⅧ，FⅧ)基因位于X染色体长臂末端(Xq28)，长186kb，有26个外显子和25个内含子。直接检测基因突变的方法是最理想、最准确和最可靠的诊断方法，然而FⅧ基因突变具有明显的异质性，目前已有500余种报道，使得直接法在血友病A的诊断中变得困难，因此作为间接法的DNA多态性标志物连锁分析是目前广泛采用的方法。间接诊断的方法必须有先证者的DNA，且患者的母亲必须是该分析位点的杂合子。目前已有许多FⅧ基因内或旁的多态性标志物被报道，如内含子18的BclⅠ、内含子22的Xha、内含子19的HindⅢ限制性片断多态性(RestrictFragmentLengthPolymorphism，RFLP)，内含子13和22的CA双核苷酸短重复序列(SimpleTandemRepeats，STR)以及外源性的定位在距FⅧ基因2cM处的ST14(DXS52)可变数目串联重复序列(VariableNumberTandemRepeats，VNTR)等。这些标志物已被广泛应用于血友病A携带者的基因检测与产前诊断。不同地区、不同民族中各多态性标志物的杂合率有所不同，本研究采用对中国人提供信息量较多的BclⅠ、ST14(DXS52)两个位点对血友病A家系进行基因分析。 研究对象选自2004年10月～2005年11月山西医科大学第二医院及山西省儿童医院门诊及住院的8个血友病A患者及其家系成员42人，家系中17例女性需做携带者诊断，其中1例无家族史，为散发家系。所有家系中的先证者按血友病A诊断标准确诊。 采用比浊法测定活化部分凝血活酶时间(ActivatedPartialThromboplastinTime，APTT)、凝血酶原时间(ProthrmbinTime，PT)、凝血酶时间(ThrombinTime，TT)；血浆凝固法(一期法)检测FⅧ活性(FⅧ：C)、FIX活性(FⅨ：C)；常规酚-氯仿法提取DNA；ST14位点采用聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction，PCR)进行产物分析，BclⅠ位点采用聚合酶链反应-限制性片断多态性(PolymeraseChainReaction-RestrictFragmentLengthPolymorphism，PCR-RFLP)方法进行分析。 BclⅠ是位于FⅧ基因内含子18中的RFLP位点，运用BclⅠ位点对8个血友病A家系进行检测，结果显示：17例女性中4例为142/99bp杂合子，其余均为99/99bp纯合子，杂合率为23.53％(4/17)。25例男性中，仅1例为142bp/Y，其余均为99bp/Y。其中3个血友病A家系中先证者的母亲为142/99bp杂合子，用BclⅠ位点可以提供诊断信息，并为5例血友病A家系女性成员作出携带者诊断，信息率为37.5％(3/8)。另5个血友病A家系中先证者的母亲呈99/99bp纯合子，无法利用该位点作出分析。 ST14(DXS52)位点在遗传图谱上距FⅧ基因的相对距离为2cM，是一个具有多个等位基因的VNTR位点。本研究运用ST14(DXS52)位点对3个BclⅠ位点无信息的血友病A家系进行基因分析，等位基因片段介于700～1700bp之间，以700bp最多见(9/23)，占39.13％，与国内文献报道相符。8例女性中仅1例为纯合子，7例为杂合子，杂合率为87.5％。其中2个血友病A家系中先证者的母亲为杂合子，利用该位点可以提供诊断信息，并检出4例携带者，2例被诊断为正常女性。而另1个血友病A家系中先证者的母亲为纯合子，不能利用该位点进行携带者诊断。由于该位点位于FⅧ基因外，与FⅧ基因间存在5％的重组率，最好有其他指标佐证以防误诊。 本课题运用BclⅠ位点为3个血友病A家系提供诊断，而联合应用ST14(DXS52)位点可以为5个血友病A家系作出诊断。因此运用单个遗传标志进行基因分析，信息量小、检测率低，联合多个多态性位点进行家系分析才可能做出较可靠的诊断，并提高诊断率。而且在中国人群中有待开发更多的FⅧ基因内信息量大的分子遗传标志，以提高血友病A的携带者及产前诊断的诊断率。